周国燕 蓝 浩 李红卫

（上海理工大学生物系统热科学研究所，上海 200093）

退火温度对聚合酶链式反应焓值的影响

周国燕 蓝 浩 李红卫

（上海理工大学生物系统热科学研究所，上海 200093）

在聚合酶链式反应（PCR）热循环中，退火温度的选取至关重要，该因素的稍微变化对PCR扩增会产生很大的影响，导致整个PCR的热现象变化。通过差示扫描量技术（DSC）研究HBV在不同退火温度时焓值随循环数的变化。结果表明：PCR扩增在变性阶段吸热，在退火和延伸阶段放热，每一个PCR循环呈现放热效应，同时退火温度高导致平台期的前移和焓值的降低，53℃退火最佳。

聚合酶链式反应；焓值；差示扫描热量技术；退火温度；循环数

聚合酶链式反应 （polymerase chain reaction，简 称PCR），是一种体外快速扩增特异 NA片段技术［1］，由Kary.B.Mullis等于1985年在PE－Cetus公司发明并命名。PCR虽然在设计上十分简单，但实际上是个非常复杂的生化反应过程，目前为止还是一种半经验性的技术，此外PCR的高度敏感性导致任何因素的微小变化都会很大程度影响检测结果，如假阴、假阳性问题和非特异扩增［2］。故探索研究PCR的影响因素及控制方法很有必要。

PCR热循环过程各阶段温度的选取对其扩增结果的影响很大，其中退火温度的高低不仅决定着反应的特异性，也影响着反应的扩增效率。现有的研究［3，4］表明：退火过程首先是引物和模板形成复合物，其次形成引物－模板－酶三倍体复合物，该过程伴随着化学键的不断生成和断裂，引起吸放热现象的产生。Conceicao等［5］用等温滴定法研究了模板引导DNA复制过程中的碱基插入和延伸时热动力学变化，结果表明酶促催化的碱基插入和DNA延伸过程是个放热过程。……