夏 雨 弓紫丰 成玉梁 赵 莹 孙 震

（江南大学食品学院，江苏 无锡 214122）

信号肽编码序列库的构建及耐热乳糖酶的分泌

夏 雨 弓紫丰 成玉梁 赵 莹 孙 震

（江南大学食品学院，江苏 无锡 214122）

为了实现来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的β－半乳糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达，建立一种较简便的方法筛选能够分泌该酶的信号肽，即针对11种信号肽构建信号肽编码序列库，采用随机筛选方法得到合适的信号肽，构建相应的分泌表达载体和重组表达菌株。结果表明，通过信号肽随机筛选方法获得的枯草芽孢杆菌中性蛋白酶NprE信号肽能够有效引导该酶的细胞外分泌，重组菌株摇瓶培养16h后，上清液中积累的耐热β－半乳糖苷酶活力达到64.02U/mL，占该酶所表达的总酶活力的29.6%。该信号肽筛选方法可以为微生物蛋白质分泌过程中的信号肽快速选择和优化提供参考。

β－半乳糖苷酶；枯草芽孢杆菌；蛋白质分泌；信号肽

β－半乳糖苷酶（EC 3.2.1.23）能催化乳糖水解生成葡萄糖和半乳糖，在食品工业中有重要应用。乳品工业中常采用β－半乳糖苷酶水解牛乳中乳糖，生产低乳糖牛乳以便解决“乳糖不耐症”问题［1］。目前乳品工业中使用的β－半乳糖苷酶主要是来源于酵母或霉菌的中温乳糖酶［2］，最适反应温度在40℃左右，在该温度下进行牛乳中乳糖水解反应时，产品容易受到微生物污染，因此对生产工艺有较高的要求；而来源于嗜热微生物的耐热β－半乳糖苷酶其最适反应温度一般在55℃以上，采用这类耐热β－半乳糖苷酶，乳糖水解反应可以在较高温度下进行以便减少微生物污染的可能性［2］。……