张驰，杨军，刘新梅，王晓丽

（国家农副产品监督检验中心，南京市产品质量监督检验院，江苏 南京 210028）

食品中3种致病菌的Taqman多重荧光定量PCR检测

张驰，杨军，刘新梅，王晓丽

（国家农副产品监督检验中心，南京市产品质量监督检验院，江苏 南京 210028）

利用实时荧光定量PCR（RTi-PCR）技术探索病原微生物的快速高通量检测方法已是食品微生物学的研究热点之一。首先，通过调整混合培养基的配比摸索食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌的快速共增菌条件，并选择稳定高效的细菌基因组DNA提取方法，然后根据3种目标致病菌的保守基因分别设计RTi-PCR引物和双标记Taqman探针，分别使用FAM、TAMRA及CY5作为报告基团，对致病菌进行多重RTi-PCR检测，并设计、构建了阳性内参用于检测反应体系。结果表明，方法针对42种已知目标菌株和21种已知菌株组合特异性良好，检测限可达101cfu/PCR反应，且反应体系各组分间未见交叉干扰。阳性内参Ct值保持稳定，有效地保证了检测的可靠性。对人工污染的食品盲样检测验证了方法的实用性。总之，建立了一种食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌同时快速检测的多重RTi-PCR方法，为食源性致病菌的检测提供了新的方法学依据。

金黄色葡萄球菌；沙门氏菌；志贺氏菌；荧光定量PCR；阳性内参

金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌是3种常见的食源性致病菌，也是我国食品国家卫生标准中致病菌检测的3项重要指标。其中金黄色葡萄球菌是引起人类化脓性感染最常见的致病菌；……