孔 霞， 顾帝水， 陈 锦， 黄培春

(广东医学院病理生理学教研室, 广东 东莞 523808)

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞P53、COX-2和VEGF表达的影响*

孔 霞， 顾帝水， 陈 锦， 黄培春△

(广东医学院病理生理学教研室, 广东 东莞 523808)

目的研究口虾蛄提取物(EOS)对人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)中P53、环氧化酶2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及意义。方法不同浓度EOS(0 mg/L、125 mg/L、250 mg/L和500 mg/L)作用CNE-2Z细胞24 h后，Western blotting检测P53蛋白表达，免疫细胞化学法及RT-PCR法分别检测COX-2 、VEGF蛋白和mRNA的表达。结果CNE-2Z细胞中P53蛋白、COX-2和VEGF蛋白和mRNA表达均随EOS作用浓度增高而逐渐降低，呈量效关系(P<0.01)；且COX-2 和VEGF表达量呈正相关(P<0.05)，COX-2 和P53表达量亦呈正相关(P<0.05)。结论EOS可能通过抑制CNE-2Z细胞中P53蛋白的表达,干扰COX-2和VEGF的表达而发挥其抗肿瘤作用的。

口虾蛄； 鼻咽癌； 蛋白质P53； 环氧化酶2； 血管内皮生长因子

口虾蛄提取物(extract ofOratosquilla, EOS)是本课题组从海洋生物口虾蛄中提取和分离的抗鼻咽癌活性成分[1-3]，其主要化学成分可能是生物碱类[3]。但其具体抗癌机制还不清楚，需要进一步深入研究。本研究旨在进一步探讨EOS对人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)中P53、环氧化酶2(cyclooxygenase-2，COX-2) 和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达的影响，以揭示EOS抗癌的可能机制。

材 料 和 方 法

1材料

EOS及CNE-2Z均由广东医学院肿瘤研究所提供；RT-PCR试剂盒(Qiagen)；RNA提取试剂盒(Trizol，Invitrogen)；PCR引物(由上海生工合成)；鼠抗人P53、COX-2和VEGF单克隆抗体为Santa Cruz。

2方法

2.1CNE-2Z细胞培养 采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液，37 ℃、5% CO2孵箱中培养。取对数生长期细胞进行实验。

2.2EOS的提取、配制及实验分组 采用系统溶剂法提取分离获得口虾蛄乙酸乙酯提取物即EOS，具体方法参见文献[1]。EOS不溶于水，以二甲基亚砜(DMSO)溶解配制成1 kg/L，分装于4 ℃保存。临用前将EOS稀释成所需的浓度。实验分4组：实验前将溶解后的EOS加入各组细胞培……