景黎君， 贾永林， 鲁晶晶， 韩 瑞， 王舒阳， 李尽义， 彭 涛， 贾延劼

(郑州大学第一附属医院神经内科, 河南 郑州 450052)

MicroRNA-9-1慢病毒载体的构建及其对小鼠骨髓间质干细胞诱导分化为神经细胞的影响*

景黎君， 贾永林， 鲁晶晶， 韩 瑞， 王舒阳， 李尽义， 彭 涛， 贾延劼△

(郑州大学第一附属医院神经内科, 河南 郑州 450052)

目的探讨microRNA-9-1在体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化中的作用。方法构建小鼠microRNA-9-1慢病毒载体(microRNA-9-1-LV)并感染小鼠MSCs，筛选最适感染复数(MOI)；实验分为未感染组、感染组(感染microRNA-9-1-LV)、阴性对照组(感染FU-RNAi-NC-LV)；采用β-巯基乙醇诱导感染后小鼠MSCs分化为神经细胞。倒置荧光显微镜下观察MSCs感染后荧光表达情况；采用免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经微管结合蛋白(MAP-2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化；PT-PCR检测MAP-2 mRNA的表达变化；MTT方法检测细胞存活率。结果(1)阳性克隆PCR证明小鼠microRNA-9-1慢病毒载体构建成功，孔稀释法测定病毒滴度为1×1012TU/L。(2)倒置显微镜下观察小鼠microRNA-9-1慢病毒载体感染成功，MOI值为20，感染4 d时感染率最高，细胞存活率较高，感染率可达 91.3%±4.2%。(3)β-巯基乙醇可以诱导MSCs向神经细胞分化，其中以感染组诱导效果最佳，NSE和MAP-2的表达率显著高于其它各组(P<0.05)。结论(1)MicroRNA-9-1-LV可高效感染小鼠MSCs。(2) 感染miRNA-9-1-LV后MSCs经β-巯基乙醇诱导向神经细胞分化比率增加。

MicroRNA-9-1； 骨髓间充质干细胞； 神经元； 慢病毒

MicroRNA是生物体内源的小RNA分子，可以在转录水平、转录后水平、表观遗传学水平等水平调控基因组的表达，参与生命过程中一系列的重要进程[1]。诱导骨髓间质干细胞(marrow mesenchymal stem cells, MSCs)分化为神经细胞有可能成为临床中枢神经系统疾病治疗的可行性方法[2]，但其具体机制尚不清楚，研究发现MSCs分化为神经细胞过程中，microRNA在其中起着重要调控作用[3]。……