丁 宁， 肖 慧， 许立新， 佘守章

(广州市第一人民医院1麻醉科和麻醉学实验室，2门诊部，广东 广州 510180)

机械牵张诱导THP-1细胞高迁移率族蛋白B1移位出核*

丁 宁1△， 肖 慧2， 许立新1， 佘守章1

(广州市第一人民医院1麻醉科和麻醉学实验室，2门诊部，广东 广州 510180)

目的探讨机械牵张对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在THP-1细胞内移位的影响。方法构建HMGB1-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的真核表达载体。通过两步亚克隆的方法，将HMGB1和EGFP的编码序列以融合蛋白的形式克隆到pcDNA3-HA载体上，随后转染THP-1细胞并施加机械牵张应变，荧光显微镜观察HMGB1在细胞内的表达及移位情况。结果重组质粒经酶切鉴定证明构建正确，并在THP-1细胞中大量表达。荧光显微镜观察发现，HMGB1-EGFP融合蛋白主要分布于细胞核，经机械牵张18 h，可见细胞中融合蛋白从细胞核移位到细胞质，在细胞浆中观察到明显的绿色荧光。结论成功构建了HMGB1-EGFP融合蛋白，在THP-1细胞中观察到机械牵张可诱导HMGB1移位出核。

机械牵张； 高迁移率族蛋白质类； THP-1细胞

呼吸机所致肺损伤(ventilator-induced lung injury, VILI)是危重病人进行机械通气支持治疗时常见而严重的并发症，其本质是由机械牵张所引起的肺内炎症介质过度释放，引起或加重肺损伤[1-3]。我们研究发现，高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1 protein, HMGB1)作为关键性“晚期”炎症介质，在VILI的发病过程中发挥重要作用[4,5]，并利用荧光素酶报告基因载体系统发现机械牵张对HMGB1蛋白的激活作用发生于转录水平[6]。为了进一步证实HMGB1在VILI中的作用及其在细胞内的定位与移位机制，我们……