陈 瑛， 竺飞燕， 王 炼， 包琼琼， 刘 云， 胡 乔， 张 雄

(温州医学院附属第二医院神经内科，浙江 温州 325027)

DMT1在多巴胺能神经元变性中的作用研究*

陈 瑛， 竺飞燕， 王 炼， 包琼琼， 刘 云， 胡 乔， 张 雄△

(温州医学院附属第二医院神经内科，浙江 温州 325027)

目的研究二价金属离子转运蛋白1(DMT1)在乳胞素(lactacystin)诱导的SH-SY5Y细胞中的表达改变，从而进一步了解DMT1在帕金森病(PD)神经元损伤中的可能作用机制。方法建立 lactacystin 损伤的SH-SY5Y细胞模型，用免疫荧光、Western blotting等方法检测细胞DMT1表达水平的变化；在高亚铁环境下，荧光探针DCFH-DA检测胞内氧化应激水平的变化，免疫组织化学法、Western blotting检测胞内α-突触核蛋白(α-SYN)聚合体的改变。结果Lactacystin处理后，细胞活力呈浓度依赖性降低。与正常对照组相比，lactacystin处理组DMT1表达增加(P<0.01)。正常对照组、lactacystin处理组及Fe2+处理组3组比较，其细胞活力逐渐降低，胞内氧化应激反应逐渐增强，胞浆α-SYN低聚体(43-55 kD)表达量逐渐增多(P<0.05)。结论Lactacystin诱导SH-SY5Y细胞高表达DMT1，增强细胞摄铁能力，这可能是铁直接或者通过氧化应激反应促进胞内α-SYN的错误折叠和聚集、最终导致PD神经元损伤的关键因素。

二价金属离子转运蛋白1； 二价铁； 乳胞素； SH-SY5Y细胞； α-突触核蛋白； 氧化性应激； 帕金森病

帕金森病(Parkinson disease,PD)是一种以中脑黑质致密部多巴胺能神经元的选择性变性死亡, 以及在残存的神经元胞浆中出现以α-突触核蛋白(alpha-synuclein, α-SYN)为主要成分的淀粉样蛋白包涵体-Lewy小体为主要病理特征的中枢神经退行性疾病[1]。PD 的病因和发病机制不明，近来研究发现，在家族性及散发性PD患者均存在泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system, UPS)功能降低[2]，由此推断，UPS功能损害可能是PD发病的共同分子通路[3]。有足够的证据证实铁在PD中是一个关键因素，其中有研究显示，铁可以直接或者通过氧化应激干扰UPS功能，从而导致多巴胺能神经元死亡。本课题组前期实验发现，蛋白酶体抑制剂乳胞素(lactacystin)诱导的PD模型小鼠中脑局部铁含量增加及多巴胺能神经元丢失，同时向脑内注射铁离子螯合剂可以显著降低黑质铁水平并部分逆转多巴胺能神经元的丢失及胞内包涵体的形成[4]。……