秦 丽, 张惠华, 郭淑军, 段飞蝶, 陈友鹏， 梁旭竞， 陈小佳△

(1暨南大学生物工程研究所,基因工程药物国家工程研究中心,广东省生物工程药物重点实验室； 2暨南大学附属第一医院感染科，广东 广州 510632)

外源性EGR1瞬时表达对骨肉瘤细胞细胞周期和凋亡的影响*

秦 丽1, 张惠华1, 郭淑军1, 段飞蝶1, 陈友鹏2， 梁旭竞2， 陈小佳1△

(1暨南大学生物工程研究所,基因工程药物国家工程研究中心,广东省生物工程药物重点实验室；2暨南大学附属第一医院感染科，广东 广州 510632)

目的获得人早期生长反应1(EGR1)基因，并在人骨肉瘤细胞中瞬时表达，研究该基因在人骨肉瘤细胞中的作用，并探讨其可能的作用机制。方法以人胎盘组织为模板，巢式PCR(nest PCR)扩增获得EGR1全长基因，克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-)，酶切、PCR鉴定并测序正确后，命名为pcDNA-EGR1。脂质体法将重组载体转染人骨肉瘤细胞U2OS，实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫印迹检测目的基因的表达； MTT法检测细胞生长和增殖情况；流式细胞仪和DAPI染色检测细胞的周期变化和凋亡情况；qPCR检测细胞中与细胞周期、凋亡相关基因的表达变化情况；短发夹RNA(shRNA)干扰EGR1后，检测细胞的变化情况。结果成功获得了人EGR1基因并构建了其重组表达载体pcDNA-EGR1。EGR1可有效地在U2OS中瞬时表达；可显著抑制细胞增殖(P<0.05)，并呈一定的剂量依赖。EGR1可引起细胞周期停滞于G0/G1期，并促进凋亡率增加(P<0.05)。EGR1可引起细胞核出现明显的固缩和凋亡表型。EGR1可引起周期相关基因表达下调，凋亡相关基因表达则显著上调。shRNA干扰EGR1后，细胞凋亡表型和EGR1所调控的相关基因表达水平与对照组一致。结论EGR1具有抑制骨肉瘤细胞增殖作用，能调节骨肉瘤细胞周期和凋亡相关基因的表达，从而促进细胞周期停滞和凋亡率的增加。

基因,早期生长反应； 瞬时表达； 骨肉瘤细胞； 生长抑制

早期生长反应1(early growth response 1, EGR1)蛋白是一个重要的核转录因子，又称为神经生长因子诱导蛋白1(nerve growth factor-induced protein A,NGFI-A)、锌指蛋白268(zinc finger protein 268，Zif268)、锌指蛋白225(zinc finger protein 225,Zif225)和Krox-24蛋白。其基因EGR1为早期生长反应基因家族(EGR family)重要成员，编码59 kD的核磷蛋白，最早被发现是因其能被丝裂原和分化因子诱导[1]，无外界刺激时，EGR1在大多数组织中表达量都很低。……