郭艳丽， 郭 炜， 邝 钢， 杨植彬， 董稚明

(河北医科大学第四医院河北省肿瘤研究所病理研究室，河北 石家庄 050011)

食管鳞状细胞癌中SFRP基因家族启动子区甲基化状态的检测*

郭艳丽， 郭 炜， 邝 钢， 杨植彬， 董稚明△

(河北医科大学第四医院河北省肿瘤研究所病理研究室，河北 石家庄 050011)

目的检测食管鳞状细胞癌(ESCC)中Wnt通路拮抗基因家族分泌型卷曲相关蛋白(SFRP)基因的甲基化状态，探讨其与食管鳞癌发生的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MS-PCR)及RT-PCR的方法检测78例食管鳞癌及相应癌旁非肿瘤组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因的甲基化状态及mRNA表达情况，并分析其与Wnt通路中心因子β-catenin蛋白表达的关系。结果在食管鳞癌组织中，SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因的甲基化率分别为65.4%(51/78)、69.2%(54/78)、62.8%(49/78)和52.6%(41/78)，均明显高于癌旁非肿瘤组织(P<0.01)。这4个基因的甲基化率与肿瘤患者的组织学分级及临床分期均无关,但它们共同发生甲基化的频率则与临床分期显著相关(P<0.05)。这4个基因mRNA的阳性表达率分别为42.3%(33/78)、46.2%(36/78)、50.0%(39/78)和39.7%(31/78)，均明显低于癌旁非肿瘤组织(P<0.01)。在发生甲基化的食管癌组织中这4个基因的mRNA表达阳性率及β-catenin蛋白的异质表达率均明显低于未发生甲基化的癌组织，且差异显著(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中SFRP1、SFRP2、SFRP4和SFRP5基因均呈高甲基化状态，并有可能通过Wnt/β-catenin信号转导通路参与了食管癌的发生。联合检测SFRP基因家族甲基化状态对于食管癌的预后判断有一定指导意义。

食管肿瘤; 甲基化; 分泌型卷曲相关蛋白; Wnt通路

分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related protein，SFRP)基因家族作为肿瘤抑制基因，是Wnt/β-catenin信号转导通路的拮抗基因，其表达的下调可减弱对通路的抑制作用，促使通路活化，被激活的Wnt信号转导通路可参与人类多种肿瘤的发生[1,2]。有研究表明，基因启动子区5′端 CpG岛甲基化可能是引起基因表达下调的重要机制。本研究检测了中国食管癌高发区78例食管癌患者的癌及癌旁组织中SFRP基因家族的甲基化状态及其mRNA表达情况，探讨其与食管癌发生的关系及可能的作用机制，以期从分子水平揭示食管癌的病因。

材 料 和 方 法

1主要试剂

蛋白酶K(Merck)；氢醌(Sigma)；亚硫酸氢钠(Sigma)；Wizard DNA 纯化试剂盒(Promega)；Trizol(Invitrogen)，引物(北京赛百胜公司合成)。即用型免疫组织化学SP试剂盒(SP-9000，中衫金桥)，鼠抗人单克隆抗体β-catenin(CAT-5H10, Zymed Laboratories，1∶100稀释)。……