尹青松, 谭 获， 杨力建, 陈少华， 查显丰， 叶静梅， 李扬秋,4△

(1河南省肿瘤医院，河南 郑州 450008； 暨南大学 2医学院血液病研究所，4 再生医学教育部重点实验室，广东 广州 510632； 3 广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心，广东 广州 510260)

TCR Vα23-Vβ13基因修饰T细胞及其特异性细胞毒活性研究*

尹青松1,2, 谭 获3， 杨力建2, 陈少华2， 查显丰2， 叶静梅3， 李扬秋2,4△

(1河南省肿瘤医院，河南 郑州 450008； 暨南大学2医学院血液病研究所，4再生医学教育部重点实验室，广东 广州 510632；3广州医学院第一附属医院肿瘤血液中心，广东 广州 510260)

目的分析弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)抗原特异T细胞受体(TCR)Vα23-Vβ13基因修饰T细胞后的体外特异性杀伤活性。方法扩增并克隆已鉴定的DLBCL患者外周血中单克隆增殖T细胞的TCRVβ13和TCRVα23基因全长序列，构建TCRVβ13-IRES-TCR-Vα23双基因重组质粒，经核转染的方法将其转染正常人T细胞，通过real-time PCR和Western blotting检测TCRVβ13和TCRVα23这2个外源基因在mRNA和蛋白水平的体外表达情况，并对TCR转基因T细胞进行体外细胞毒性检测。结果经酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确，转染正常人T细胞后，TCRVβ13和TCRVα23在mRNA及蛋白水平实现了共表达。转染后3 d，TCR转基因T细胞对DLBCL细胞株Toledo细胞的杀伤活性明显高于非特异细胞株Raji细胞和Molt-4细胞，显示出特异性细胞毒活性。结论成功构建DLBCL相关抗原特异的TCRVβ13-IRES-TCRVα23双基因真核表达质粒；TCR基因修饰T细胞可获得特异性细胞毒活性。

弥漫大B细胞淋巴瘤； TCR转基因； 细胞毒活性

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL)是最常见的非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma，NHL)，约占新诊断病例的30-40%，占侵袭性淋巴瘤的80-90%。多年来主要采用以CHOP方案(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱、泼尼松)为主的联合化疗，但长期生存率低。……