鲍苑苑, 方 舟, 周丽诺△, 胡仁明, 丁 薇

(复旦大学1附属华山医院内分泌科，2生命科学院，上海 200040)

脂肪分化相关蛋白真核表达载体的构建及其对H9c2心肌细胞增殖和凋亡的影响*

鲍苑苑1, 方 舟2, 周丽诺1△, 胡仁明1, 丁 薇1

(复旦大学1附属华山医院内分泌科，2生命科学院，上海 200040)

目的构建编码脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein, ADRP)基因全长序列的真核表达载体，探讨ADRP过表达对软脂酸诱导的H9c2心肌细胞凋亡有何影响。方法(1)RT-PCR扩增编码ADRP全长的 DNA 序列，重组入pEGFP-C1质粒表达载体中，酶切、测序鉴定后转化大肠埃希菌DH5α，挑取阳性克隆，扩增后提取质粒并进行鉴定；采用脂质体转染法将鉴定后的重组质粒稳定转染H9c2心肌细胞；荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达情况；RT-qPCR和Western blotting检测ADRP表达情况；(2)采用MTT比色法和流式细胞术检测不同浓度软脂酸对细胞增殖和凋亡的影响。结果(1)成功构建了真核质粒表达载体pEGFP-C1-ADRP，转染H9c2细胞后，荧光显微镜下观察发现细胞内有绿色荧光蛋白表达；RT-qPCR和Western blotting显示重组质粒转染H9c2细胞ADRP mRNA和蛋白表达水平明显高于空质粒转染组和正常对照组(P<0.01)；(2)经不同软脂酸刺激后，重组质粒转染H9c2细胞增殖抑制率和凋亡率均明显低于空质粒转染组和正常对照组(P<0.05)。结论(1)成功获得了稳定表达ADRP的H9c2心肌细胞株；(2)软脂酸可抑制H9c2心肌细胞增殖并可诱导其凋亡，而ADRP高表达可对抗软脂酸的这一作用，表明ADRP对高脂环境中心肌细胞可能具有一定的保护作用。

脂肪分化相关蛋白质； H9c2细胞； 棕榈酸； 细胞凋亡

糖尿病心脏病是糖尿病患者死亡的最主要原因之一，其早期的临床表现为心室舒张功能障碍，随后可出现收缩功能受损，逐渐发展为充血性心力衰竭。糖尿病心脏病患者存在游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)过剩，可对心肌细胞造成损伤[1]。脂肪分化相关蛋白(adipocyte differentiation-related protein，ADRP)是细胞内脂滴表面PAT家族蛋白的一种。研究发现，ADRP可促进细胞对FFA的吸收并将其转化为甘油三酯(triglyceride, TG)储存于脂滴内[2]。……