李忠亮，王晓波，张治然，袭荣刚 (解放军第210医院药剂科，大连116021)

[本文编辑] 邢文荣

盐酸依匹斯汀是第二代组胺H1受体拮抗药和肥大细胞组胺释放抑制药，临床用于防治成人过敏性鼻炎、过敏性支气管哮喘等疾病。文献[1，2]报道该药在不同人群间的药动学有差异，但在中国不同民族人群间是否也存在药动学差异尚无文献报道。本研究采用HPLC法测定依匹斯汀血药浓度，研究其在中国汉族和藏族人中的药动学，从而为多民族间的合理用药提供药动学参考数据。

1 仪器和试药

1.1 仪器 LC－10ATvp高压液相系统，包括 Sil－10ADvp自动进样器，SPD－10Avp紫外检测器，Kromasil C18柱(迪马公司)，Class－VP色谱工作站(日本岛津公司)；TGL－16M台式高速冷冻离心机(湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司)；XW－80A微型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)；TG328A型分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；MTN－2800W氮吹浓缩装置(天津奥特塞恩斯仪器有限公司)。

1.2 试药 盐酸依匹斯汀片(规格：10mg／片，德国勃林格殷格翰制药有限公司，批号589415)；盐酸依匹斯汀对照品(批号100437－200601)和替硝唑内标物(批号100095－200304)由中国药品生物制品检定所提供；甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸、三乙胺和二氯甲烷均为分析纯；水为重蒸水(解放军第210医院自制)；空白人血浆由本院输血科提供。

2 方 法

2.1 受试者选择 选择汉族健康受试者10名，男女各半，年龄(22.3±1.2)岁，体重(54.8±5.3)kg，身高(166.5±2.1)cm。选择藏族健康受试者10名，男女各半，年龄(25.7±1.4)岁，体重(61.4±5.6)kg，身高(169.6±2.7)cm。健康受试者三代内均为同族婚配。所有受试者体格检查示肝、肾功能正常，不吸烟、不嗜酒。女性健康受试者受试时间避开月经、妊娠及哺乳期。试验前两周内未服用任何其他药物。受试者均签署知情同意书。临床试验方案经本院医学伦理委员会批准。

2.2 试验方案和血样采集 试验采用单剂量给药。受试者于试验前1d晚餐后开始禁食不禁水；于试验当日清晨，空腹口服盐酸依匹斯汀片20mg，温开水200ml吞服，服药2h后，可自由饮水；4h后进统一清淡低脂饮食。服药期间禁烟、酒和含咖啡因类饮料，避免剧烈运动和长时间卧床。受试者于服药前(0h)和服药后的0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、8、12、24、36、48、60h于肘静脉取含药血5ml，置肝素化试管中，在2.1×103×g条件下，离心10min，分离血浆，置－70℃冰箱保存待测。

2.3 色谱条件 流动相：乙腈－0.3%三乙胺(25:75，用磷酸调pH 值为3.5)；流速1.0ml／min；色谱柱：Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；检测波长为220nm，柱温：30℃，进样量：20μl。

2.4 样品预处理 精密量取含药血浆500μl，置10ml离心管中，加入内标溶液(400ng／ml替硝唑)10μl，加0.2mol／L Na2CO30.3ml，加二氯甲烷4ml，涡旋30min，在2.7×103×g条件下，离心10min。取有机层，置5ml离心管中，于37℃ 水浴中氮气流吹干，残渣用流动相100μl溶解，涡旋1min，移至1.5ml离心管中，在3.8×104×g条件下，离心5min，取上清液20μl进样分析。

2.5 标准溶液的配制 精密称取盐酸依匹斯汀对照品10.0mg，置1000ml容量瓶中，用甲醇定容，制成10.0μg／ml盐酸依匹斯汀储备液。精密量取盐酸依匹斯汀储备液0.25、0.5、1、2、4、8ml，置100ml容量瓶中，用甲醇定容，即得0.025、0.050、0.100、0.200、0.400、0.800μg／ml系列浓度对照品溶液。精密称取替硝唑对照品20.0mg，置50ml容量瓶中，用甲醇定容，制成400μg／ml替硝唑储备液；使用时用甲醇稀释成100ng／ml的工作浓度。

2.6 数据处理与统计分析 用DAS 2.1软件对血药浓度－时间数据进行拟合，以非室模型估算主要药动学参数。tmax和cmax均为实测值，AUC采用梯形法计算。主要药动学参数经对数转换后采用SPSS 10.0软件作正态分布检验，对正态分布的参数作t检验，其余参数作非参数检验，评价不同民族间和不同性别间药动学参数的差异是否有统计学意义。

3 结 果

3.1 方法专属性 由图1可见，在选定的色谱条件下，药物、血浆中内源性杂质和内标物分离完全，峰形良好，不干扰依匹斯汀的测定。内标样品替硝唑的浓度为100ng／ml，保留时间约为3.5min；依匹斯汀的保留时间约为5.5min，分离度＞1.5。

图1 人血浆中依匹斯汀的HPLC谱图Figure 1 HPLC photograms of epinastine in human plasma

3.2 标准曲线的制备 精密量取空白血浆500μl，置10ml离心管中，分别精密加入上述盐酸依匹斯汀系列对照品溶液各100μl，制成盐酸依匹斯汀浓度为5、10、20、40、80、160ng／ml的血浆样品，按2.4项下方法处理血浆样品，进行色谱分析。以盐酸依匹斯汀峰面积与内标峰面积比(Y)对浓度(X)进行线性回归，得标准曲线方程：Y＝0.038 4X－0.026 5(r＝0.999 6)，线性范围5～160ng／ml。本法测定血浆中盐酸依匹斯汀的最小检测浓度为5ng／ml。

3.3 回收率与精密度实验 精密量取空白血浆500μl 9份，均分为3组，每组分别精密加入0.050、0.200、0.800μg／ml盐酸依匹斯汀对照品溶液100μl，制成相当于依匹斯汀血浆浓度分别为10、40、160ng／ml的低、中、高三个浓度样品，将血样按2.4项下方法处理后作HPLC分析，将所得的依匹斯汀峰面积与内标峰面积的比值代入标准曲线方程，计算方法回收率分别为(95.4±3.6)%、(92.4±1.2)%和(103.2±4.6)%。取上述各浓度血样于同一天内分别测定5次，连测5d，计算日内RSD分别为1.5%、2.5%和3.2%(n＝5)，日间 RSD分别为1.3%、2.3%和3.6%(n＝5)。

3.4 稳定性实验 同法配制低、中、高三个浓度(10、40、160ng／ml)血浆样品，每个浓度3份，按2.4项下方法操作，一份在室温放置24h；一份于－70℃冰箱冷冻，反复冻融3次；一份于－70℃冷冻保存30d。结果显示，RSD均＜10%(n＝3)，表明盐酸依匹斯汀在室温、－70℃反复冻融3次以及－70℃冷冻30d的条件下稳定性均较好。

3.5 血药浓度与药动学参数 20名健康受试者单剂量口服盐酸依匹斯汀片20mg后的平均血药浓度见表1。用DAS 2.1软件进行处理，以赤池信息判据最小原则 (Akaike’s information criterion，AIC)值作为模型识别指标，结果符合二室开放模型。不同性别健康受试者单剂量口服盐酸依匹斯汀片20mg的药动学参数见表2。

表1 依匹斯汀的平均血药浓度Table 1 Mean plasma concentrations of epinastine(n＝5，±s，ρB／ng·ml－1)

表1 依匹斯汀的平均血药浓度Table 1 Mean plasma concentrations of epinastine(n＝5，±s，ρB／ng·ml－1)

时间(t／h) 男性 女性 汉族 藏族0 0 0 0 0 0.5 20.42±5.18 16.74±5.04 1 44.24±9.51 18.54±5.09 18.37±5.27 42.53±9.72 1.5 52.35±12.64 41.57±9.58 44.35±9.07 47.56±8.24 2 53.42±14.54 50.45±10.52 49.35±10.05 51.39±17.11 2.5 52.47±12.93 51.61±11.32 53.21±14.23 50.74±12.86 3 48.64±11.04 50.71±11.02 52.37±13.11 45.94±10.01 4 45.57±9.92 46.81±10.94 48.45±10.38 29.57±7.95 12 24.52±7.28 40.57±9.24 8 34.52±8.46 43.85±9.07 43.43±8.87 32.45±8.05 32.24±8.35 23.51±6.81 24 10.57±2.27 22.84±6.53 25.48±7.62 9.54±2.33 36 4.85±0.82 9.54±2.07 10.56±2.76 4.94±0.86 48 2.13±0.07 4.21±0.75 5.04±0.93 1.97±0.05 60 0.44±0.01 1.84±0.03 2.03±0.06 0.25±0.010.54±0.02 0.32±0.01

表2 单剂量口服20mg盐酸依匹斯汀片后的主要药动学参数Table 2 Main pharmacokinetic parameters of epinastine after single oral dose of 20mg epinastine hydrochloride(n＝20，±s)

表2 单剂量口服20mg盐酸依匹斯汀片后的主要药动学参数Table 2 Main pharmacokinetic parameters of epinastine after single oral dose of 20mg epinastine hydrochloride(n＝20，±s)

组别 cmax(ρB／ng·ml－1) t1／2(t／h) tmax(t／h) Vd(ml／kg)CL(ml·h－1·kg－1)AUC0～60(A／ng·h·ml－1)AUC0～∞(A／ng·h·ml－1)汉族 53.21±14.23 9.32±1.53 1.88±0.36 20.93±6.222.46±0.53 684.62±203.43 789.53±212.31藏族 51.39±17.11 9.36±1.32 1.98±0.32 22.73±9.73 2.58±0.21 702.13±157.22 828.32±244.63男性 53.42±14.54 9.31±1.23 1.89±0.39 20.95±5.23 2.41±0.45 682.52±218.21 792.24±213.82女性 51.61±11.32 9.37±1.71 1.99±0.58 22.92±4.242.59±0.36 713.31±160.32 838.21±242.61

3.6 药动学参数的比较 由表2可见，各组受试者的cmax，t1／2，表观一级吸收速率常数差异均无显著性意义(P＞0.05)。20名健康受试者均未发生明显不良反应，说明受试者在试验期间对单剂量口服盐酸依匹斯汀片耐受性良好。

4 讨 论

20名健康受试者单剂量口服20mg盐酸依匹斯汀片后，药动学参数与文献[3，4]报道基本相符。服药后约1.9h可达血药峰浓度。虽然汉族和藏族人群在药物代谢能力上存在一定的差别，但该药在两民族间体内的药动学参数差异无统计学意义(P＞0.05)，故临床上对这两个民族用药不需考虑民族间的差异。性别在生理上的差异影响药物在体内的药效和药动学过程，为此，作者考察了单剂量口服20mg盐酸依匹斯汀片后在性别间的差异，结果表明，女性的tmax和Vd稍高于男性，但差异无统计学意义(P＞0.05)，因此性别因素对本药药动学过程无明显影响。

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