谷文喜,袁 洁,陈 晶,颜 瑾,邓小玲,柯昌文,何剑锋

2.中山大学公共卫生学院,广州 510080;

3.广东省农业科学院兽医研究所,广州 510640

狂犬病是由狂犬病病毒引起的急性致死性人兽共患传染病,主要侵害中枢神经系统,造成受害动物极度兴奋、狂躁不安和意识障碍,一旦发病,病死率100%。我国是世界上狂犬病第二严重国家,疫情主要集中在南方各省,广东省是我国狂犬病高发省之一,犬是广东省狂犬病的主要传播动物。调查发现,在发病者中有 81.51%～95.7%的感染都来自犬[1-6],说明在狂犬病的流行中,犬在其中起着重要的作用。为了了解健康犬对人潜在的威胁程度,我们对广东省境内外表健康犬的狂犬病毒带毒率进行了调查。

1 实验材料和方法

1.1 标本的采集 于2008年在广东省境内随机抽取10个地市,对待销售的食用犬及流浪犬进行犬脑(海马回、小脑、中脑和大脑)的采集,标本冷链送往广东省CDC检测。

1.2 方法 用WHO推荐的狂犬病实验室诊断方法直接免疫荧光法(DFA)对所有犬脑组织样品进行狂犬病病毒抗原筛查检测,阳性样品再用巢氏聚合酶链反应(RT-PCR)和小鼠感染法(MIT)进行复核检测。阳性RT-PCR产物纯化(QIA quick PCR Purification Kit)后,直接进行测序并和部分已发表狂犬病病毒序列进行比对。

1.2.1 DFA检测犬脑组织中病毒抗原

1.2.1.1 制备脑组织印片 取大脑、中脑和小脑3个部分的横断面,均匀涂印于酒精处理过的干燥载玻片上,室温干燥后,冷丙酮(-20℃)固定过夜。

1.2.1.2 荧光染色 固定好的载玻片取出吹干,将稀释好的狂犬病毒荧光抗体……