陈静芳,胡旭初,王乐旬,余新炳

2.中山大学中山医学院病原微生物学教研室

血吸虫病是一个重大的全球性公共健康问题,据世界卫生组织调查统计,全球超过70个国家、高达2千万人口感染血吸虫;在中国,据统计2009年全国感染血吸虫病的人数为36.6万[1-2]。继人类基因组计划后,血吸虫基因组计划于1992年正式启动。2003年,nature杂志同时报道了对日本血吸虫和曼氏血吸虫转录谱的初期研究结果[3-4],随着日本血吸虫基因组测序的完成,对其不同发育阶段基因和蛋白表达动态变化的了解,将有助于探索血吸虫生长发育机制,寻找与其生长发育相关的关键的酶、功能蛋白或基因,为研制有效的阻断传播疫苗和新药开发提供科学指导。本研究从日本血吸虫EST数据库中筛选出一感兴趣的基因家族——SCP/Tpx-1/Ag5/Pr-1/ScT(SCP/TAPS)蛋白家族,通过生物信息学工具对日本血吸虫SCP/TAPS蛋白家族进行分析,并挑选出SjVAL2基因,将其构建到pET-28a(+)原核表达载体中,对表达产物进行初步的研究,为进一步阐明该基因家族的功能打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 血吸虫成虫、质粒及菌株 血吸虫成虫由感染的兔体内获得,原核表达质粒pET-28a(+)和大肠杆菌BL21/DE3由本室保存。

1.1.2 主要试剂与工具酶 Ex Taq酶(含dNTP)、BamH I、XhoI、T4 DNA 连接酶 、DNA 分子量标准(DL2,000)购自大连宝生物公司;异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)购自美国Promega公司;Ni-IDA Agarose(镍-亚氨基二乙酸琼脂糖)(cat No：69670)购自美国Novagen公司;蛋白分子量标准购自立陶宛MBI公司;DNA凝胶回收试剂盒及质粒纯化试剂盒购自北京赛百盛基因公司;抗6×His单克隆抗体购自美国Invitrogen公司;辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG二抗及DAB(3,3二氨基联苯胺)显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司;PVDF膜购自Millipore公司。……