王雪莲,栾和芝,刘 彤,赵雨杰,安春丽

2.秦皇岛港口医院检验科,秦皇岛 066000;

3.中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室,沈阳110001;

4.中国医科大学基础医学院生物芯片中心,沈阳 110001

肺孢子虫(菌)肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)是由肺孢子虫(菌)引起的一种机会感染性肺炎[1]。常见于艾滋病(AIDS)、恶性肿瘤、器官移植及其他免疫功能不全的人群[2-3]。最新的流行病学资料显示：PCP的发病率在发展中国家呈明显增长趋势,而在美国等一些发达国家,由于普遍开展了高效抗逆转录病毒疗法(HAART)之后,PCP的发病率有所下降[4],但仍然是这些国家AIDS流行第3个十年里面临的严重问题[2,5-6]。自AIDS流行以来,国内外有许多学者一直致力于PCP防治策略以及疫苗方面的研究,但是至今尚无理想的防治措施。

肺孢子虫55 kDa蛋白(p55)是肺孢子虫的主要抗原成分之一,能刺激宿主产生抗肺孢子虫的保护性免疫反应[7]。Smulian等研究发现,天然p55蛋白能刺激宿主产生明显的细胞免疫和体液免疫反应,重组p55蛋白也能对肺孢子虫感染提供保护作用[8]。Zheng等研究发现用 p55抗原制备的非CD4+T细胞依赖疫苗能够预防小鼠 PCP[9]。综上,p55是最有希望的疫苗候选抗原。由于肺孢子虫体外培养困难,导致p55抗原来源受到限制,而多个p55蛋白变异体的存在又使得免疫效果受到了影响,这些都严重地阻碍了利用p55抗原进行PCP免疫防治研究的进展。

本研究通过生物信息学手段,预测人源p55抗原及变异体的抗原表位,选择可能有效抗原表位,设计包含多个抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,人工合成该核苷酸片段,构建原核表达载体,在大肠杆菌中表达重组蛋白,并对此表达产物进行分析鉴定。……