实时荧光RT-PCR检测凝血块中乙脑病毒RNA*

2011-11-13张拥军王金章朱莉莉

中国人兽共患病学报 2011年9期

张拥军,王金章,朱莉莉,陈端,陈炜

2.福建医科大学公共卫生学院教学基地;

3.福建省实验动物质量检测中心;

4.厦门出入境检验检疫局;

流行性乙型脑炎(简称乙脑)是一种经蚊传播的人兽共患病,主要流行于东南亚及澳洲一些国家和地区。以严重的脑炎和神经疾病为特征,病死率和致残率高。其致病因子-乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科黄病毒属,基因组为全长约11 kb的单股正链RNA,编码3个结构蛋白(衣壳蛋白C、膜蛋白M和外膜蛋白E)及7个非结构蛋白(NS1、NS2A 、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)[1]。

尽管人类作为JEV传播链中的终末宿主,病毒血症期比较短暂,且病毒载量较低,从患者组织、血液或其它体液中检测JEV特异RNA依然是实验室确诊JEV感染的手段之一[1]。国内外多家实验室先后建立起一些检测JEV RNA的方法,包括逆转录PCR、逆转录套式PCR、逆转录实时荧光PCR、逆转录环介导等温扩增(LAMP)等[2-7],其中逆转录实时荧光PCR因为其快速、简便、灵敏成为主流发展方向。但我们在实际工作中发现,该方法的灵敏度还不能胜任临床样品的检测[7],因此JEV核酸检测还没有作为实验室常规诊断的备选方案。

本研究的目的,一是评价部分文献报道和自行设计的实时荧光PCR引物的检测效果,以建立更加灵敏便捷的检测方法。二是采用新建立的检测体系,分别选用部分急性期患者血清和凝血块提取病毒核酸,比较来自同一患者的两类样品分别用于JEV核酸检测的差异。现将结果报告如下。