刘叶蔓，谢果珍（湖南中医药大学，长沙市 410208）

粗毛牛膝Achyranthes bindentataBL.是苋科多年生草本植物。其根、种子、茎和叶中含有蜕皮甾酮、土牛膝皂苷、生物碱等。药理研究表明，其不同溶剂提取物在强心、抗生育、抗菌和癌细胞凋亡等方面有明显的影响[1]。植物组织和细胞培养技术的发展为药用植物有效成分的工厂化生产提供了一条有效的途径。近年来，关于怀牛膝、川牛膝组织培养方面的研究已有报道[2～4]，但至今仍无粗毛牛膝在组织培养方面的报道。因此，笔者对粗毛牛膝的组织培养进行了初步研究，并获得了再生植株。

1 仪器与材料

1.1 仪器

AF1004型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；DNP-9052型电热恒温培养箱（中新医疗仪器有限公司）；KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；超净工作台（苏州三兴净化科技有限公司）。

1.2 试药

基本培养基、萘乙酸（NAA）、6-苄基嘌呤（6-BA）均由上海艾研生物科技有限公司提供。

1.3 外植体

以粗毛牛膝带腋芽的嫩茎为外植体。

2 方法

2.1 外植体及处理

外植体经流水冲洗30 min、洗衣粉液浸洗5 min、清水清洗后，在超净工作台用75%的酒精振荡浸润2 min，用无菌水清洗4次，再用0.1%氯化汞消毒15 min，最后用无菌水清洗5次后接种在培养基上。

2.2 培养基及激素配比

选用L9（34）正交设计，根据试验号分别考察基本培养基（A）、NAA浓度（B）和6-BA浓度（C）3个因素对茎段和腋芽生长的影响。每个试验号重复20次，每瓶接种4块，40 d后统计分析结果。计算公式：腋芽生长系数＝腋芽长度（cm）总和/（接种块数－感菌块数）。因素水平见表1。

表1 因素水平Tab1 Factors and levels