白会钗，张 于，江 波，沐万孟，张 涛

(江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122)

荧光假单胞菌PSEUDOMONAS FLUORESCENCE SK17.001转化生产乳糖酸的条件研究

白会钗，张 于，江 波*，沐万孟，张 涛

(江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡214122)

利用荧光假单胞菌SK17.001为出发菌株，转化乳糖生产乳糖酸。通过研究发酵条件和培养基成分对乳糖转化率影响，表明荧光假单胞菌SK17.001的最适合转化条件为:培养温度30℃，pH 6.5，250mL摇瓶中液体培养基装液量为30mL，摇床转速为200r/min，最佳氮源为1%蛋白胨和1%酵母膏，培养时间55h，乳糖浓度为3%时，转化率可达96%。

乳糖酸，荧光假单胞菌，生物转化

1 材料与方法

1.1 材料与设备

Pseudomonas fluroscence SK17.001 本实验室从土壤中筛选获得，并鉴定;乳糖 购自Fluka公司;其他试剂 市售，均为分析纯;斜面培养基 PDA;种子培养基(g/L) 蔗糖30，氯化钾0.5，磷酸氢二钾1，硫酸镁0.2，硝酸钠3，pH 6.2;发酵培养基(g/L) 乳糖30，蛋白胨10，酵母膏10，磷酸氢二钾2，硫酸镁1;底物浓度(g/L)30。

光照恒温培养箱，高压灭菌锅，电子天平，722型分光光度计，HPLC。

1.2 培养方法

从斜面中取一定量荧光假单胞菌接种于种子培养基，28℃，200r/min，培养20h;从种子培养基接种至摇瓶发酵产酶培养基中，接种量为6%，250mL摇瓶装液量30mL，温度28℃，摇床转速200r/min，振荡培养，检测乳糖酸的含量。

1.3 菌体生长浓度测定

采用722型分光光度计，在600nm下，测定菌液的OD值。

1.4 乳糖酸含量的测定

检测乳糖酸的方法如下:取发酵液离心，上清液灭酶经微孔滤膜过滤(0.22μm)，滤液上HPLC分析。HPLC条件:Agilent1100色谱柱:Shodex SH1011 (8.0mm×300mm)，流动相为0.01mol/L H2SO4。检测器:紫外检测器，210nm，柱温:50℃，流速:0.8mL/min，进样量:10μL，乳糖酸标样浓度:1%(w/v)。

乳糖酸浓度的计算方法:峰面积/1938×1%，