李志勇,谭 鹏,赵 晖,李 飞,孙建宁△

(1.中央民族大学中国少数民族传统医学研究院,北京100081;2.北京中医药大学中药学院,北京100012;3.首都医科大学中医药学院,北京100069)

含有乌头碱、中乌头碱、次乌头碱(hypaconitine,HA)等生物碱的天然药物主要包括附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿等药材,因含有上述毒性成分在临床应用中极易发生中毒,损伤机体神经系统与心血管系统,最突出的体征为心律失常[1-4]。有研究显示,HA在附子炮制品及中成药中都有存在[5-8],且附子的毒-效表达与乌头碱、中乌头碱、HA在炮制过程中的差异配比存在相关性[9],HA在正常大鼠及离体心脏、原代培养乳鼠心肌细胞上都能引发严重心律失常[10-11]。现将HA对心肌细胞L-钙通道α1C亚基、细胞内钙调蛋白(CaM)及肌质网上雷诺定受体(Ry R2)mRNA表达的影响报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物与药品 3 d乳大鼠(北京维通利华实验动物技术有限公司)雌雄不拘,动物许可证号:SCXK(京)2002-0003。HA;(中国食品药品检定研究院),批号:200404,纯度大于或等于98%,用二甲基亚砜(DMSO)溶解,制成贮备液。

1.2 试剂与仪器 达氏修正依氏培养基/F12(DMEM/F12)购自美国sigma公司,批号 086K 83521;胰蛋白酶、胶原酶Ⅱ型(CoⅡ)、四噻唑兰(MTT)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA Na2)购自美国Amresco公司;5-溴-2-脱氧尿核苷购自Brd U,Roche公司;胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司,批号071031;First Strand cDNA Synthesis Kit购自Fermentas公司,批号 00020634;SYBR Green PCR Master Mix购自 Applied Biosystems公司,批号43049155。CJT型超净工作台购自北京昌平长城空气净化设备公司;RCO-3000T-5V型CO2恒温培养箱购自美国G.S.公司;DMILHC倒置相差显微镜购自德国Leica公司;YXOGO2型电热式蒸汽消毒器购自山东新华医疗器械股份……