张 勇 ，齐振华 ，李乐赛 ，符晓华 ，彭小宁，张 娜 ，于才红

（1.中南大学湘雅医院，湖南 长沙 410008；2.湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013；3.中南大学湘雅三医院，湖南 长沙 410013）

乳香作为橄榄科植物卡氏乳香树脂，中药乳香能活血行气、通经止痛、消肿生肌。主治心腹疼痛、风湿痹痛、经闭痛经、跌打淤痛、痈疽肿毒等。乳香作为一种应用广泛的植物药，在我国和印度都有广泛的应用[1]。20世纪中后期，自Tschirch和Halbey等第一次从Boswellic carterii乳香中分离到α和β乳香酸的混合物以来，国内外学者便开始了乳香酸类化合物的抗肿瘤活性研究[2-3]。本实验拟探讨乳香提取物对急性早幼粒性白血病HL-60细胞增殖的作用及分泌蛋白的影响。

1 材料和方法

1.1 材料

人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞为本室保存。RPMI 1640培养基为Gibco公司产品，小牛血清为Hyclone公司产品。RT-PCR试剂盒均购自华美生物工程公司，引物序列由上海生工生物技术公司合成纯化。兔抗人VEGF、Flt-1多克隆抗体购自美国Santa cruz公司。乳香提取物为中南大学湘雅医院药剂科制备。

1.2 细胞培养

将HL-60细胞悬浮培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640 培养液中，于 37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。2～3 d传代一次。取对数生长期的细胞，细胞悬液终浓度调整为(4～6)×106/mL，分别以不同浓度药物作用不同时间，以不加药物的培养细胞为空白对照，并设溶剂对照(培养基)。收集各时相细胞5×106个，离心弃去上清，加入1 mL Trizol(Gibco公司产品)试剂悬浮细胞，移入1.5 mL EP管中，-40℃保存，待抽提总RNA。

1.3 MTT试验检测乳香提取物对白血病细胞体外增殖的影响

HL-60细胞以5×104/mL浓度接种在96孔培养板中，每孔 200 μL。……