任 翔 ，刘 飞 ，韩守恒 ，曹建国

（1.湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013；2.南华大学第一附属医院，湖南 衡阳 421001）

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)具有诱导被病毒感染的细胞、恶性转化细胞和肿瘤细胞凋亡而对正常组织及细胞几乎没有毒性作用的特点[1-3]，使其极有可能成为新的抗肿瘤候选药。白杨素 (chrysin,ChR)能抑制包括人胃癌SGC-7901细胞在内的多种人肿瘤细胞系细胞生长[4-5]。Szliszka等[6]最近报道富含ChR的蜂胶乙醇提取物增强TRAIL诱导癌细胞凋亡。本文旨在研究ChR敏化TRAIL诱导SGC-7901细胞凋亡作用。

1 材料和方法

1.1 试剂

ChR和碘化丙啶(PI)为美国Sigma公司产品，TRAIL为英国PeproTech公司产品。

1.2 细胞培养

人胃癌SGC-7901细胞购于中国典型培养物保藏中心(中国武汉市)，用含10%小牛血清的RPMI-1640培养基，加100 U/mL青霉素，100 U/mL链霉素，置于37℃，5%CO2及饱和湿度培养箱中培养，3 d传代1次。

1.3 流式细胞术分析

参照文献[7]取对数生长期的SGC-7901细胞，用含0.1%的小牛血清的培养基处理24 h进行细胞周期同步化后，分别加入含标示浓度受试物的培养基处理48 h,0.1%DMSO作为溶媒对照。收集所有贴壁细胞和悬浮细胞，用4℃的75%乙醇固定24 h，经碘化丙啶(PI)染色，用流式细胞仪测定细胞DNA含量。

1.4 DNA琼脂糖凝胶电泳

参照文献[8]取对数生长期SGC-7901细胞，分别加入含标示浓度受试物的培养基处理48 h,培养基作为细胞对照，含0.1%DMSO的培养基作为溶媒对照。收集所有贴壁细胞和悬浮细胞，按北京博大泰克生物基因技术有限公司凋亡细胞DNA ladder检测试剂盒说明书步骤分别提取DNA，置于4℃冰箱过夜。再将提取的DNA样品5 μL与6×Buffer 1 μL混匀后，加到1.5%琼脂糖凝胶中进行电泳，Alphaimager TM 2200凝胶图像分析系统观察并摄影。……