刘灿均,蔡圣强,车彦军

(江苏省靖江市人民医院外科,江苏靖江,214500)

胃癌是最常见的癌肿之一,占我国消化道肿瘤的第一位。近年来的研究表明,Wnt-1信号传导途径的不恰当激活参与多种人类肿瘤的发病而蛋白激活酶受体-1(Proteinase-Activated Receptor-1 PAR-1)基因可能是与肿瘤转移相关的基因[1-2]。因此Wnt-1和PAR-1在胃癌中的基因表达以及与胃癌的病理特征3者间是否有相关性,目前国内文献尚无报道。本研究采用免疫组化的方法检测胃癌及正常胃组织中Wnt-1和PAR-1的基因表达,研讨2者在胃癌组织中表达的相关性,以及与胃癌病理特征之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本院2008年1月～2010年12月的胃癌根治术切除病例的、经10%甲醛固定的石蜡包埋的胃癌组织标本78例,其中男51例,女27例;年龄39～83岁,平均58.3岁。所有纳入研究对象的病例均接受胃癌根治术,术前均未行放、化疗和生物免疫治疗。根据入选病例的性别、年龄、肿瘤的大小、肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况以及TNM分期等病理特点进行分组,其中年龄分为<60岁组和≥60岁组,按肿瘤大小分为肿瘤直径<5 cm组和肿瘤直径≥5 cm组,淋巴结转移情况按目的蛋白表达阳性与否分为2组,其余病理特征均按等级进行分组。同时对其中50例患者的癌旁正常胃组织作为正常对照。

1.2 试剂

Wnt-1山羊抗人多克隆抗体购自Santa Cruz公司;PAR-1兔抗人多克隆抗体购自英国abcom公司;一抗工作液浓度均为1:100。二抗的山羊SP试剂盒和兔SP试剂盒均购自北京中衫金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组化染色

将入选病例的手术标本和正常对照标本经石蜡包埋后,4 μ m后的切片贴于载玻片上,经二甲苯和梯度乙醇脱蜡至水,PBS洗3次,3 min/次;热修复抗原后室温冷却,PBS洗5 min后,在过氧化氢甲醇溶液中浸泡30 min,以抑制内源性过氧化物酶的活性;然后PBS洗3次,3min/次;滴加正常的山羊血清封闭液室温下20 min,甩去多余液体,滴加一抗4℃过夜。……