王雪妮 刘凌 刘泽 王鲁妮 吴军 王伟 封菊香

血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是肾素-血管紧张素系统中最重要的活性物质，它通过与受体相结合发挥相应的生理、病理作用，如血管平滑肌收缩、动脉血压升高等，可继发性引起动脉粥样硬化。但有研究发现，AngⅡ能刺激血管自由基的产生，促进血管内皮细胞炎症反应和功能障碍，加速血管内皮细胞衰老，参与动脉粥样硬化发生和发展的过程［1］，提示AngⅡ参与动脉粥样硬化可能有另外其他的机制。P-选择素属于细胞黏附分子中的选择素家族，是内皮细胞损伤及血小板活化的特异性指标，可能参与动脉硬化的早期阶段［2］。本研究以建立AngⅡ诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老模型，观察AngⅡ对内皮细胞衰老及P-选择素表达的影响，探讨AngⅡ在动脉粥样硬化的发生、发展中所起的作用。

1 材料与方法

1.1 主要材料 人脐静脉血管内皮细胞株HUVEC由广州军区广州总医院医学实验科提供;RPMI1640培养基、胎牛血清购自美国HYCLONE公司;AngⅡ、CCK-8购自美国Sigma公司;Human's P-selectin Platinum ELISA试剂盒购自美国eBioscience公司;细胞周期流式细胞分析试剂盒、细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶(β-gal)检测试剂盒购自上海杰美公司;倒置显微镜(Olympus公司，日本)，酶标仪(Tecan Genios，瑞士)，流式细胞仪(Miltenyi公司，德国)。

1.2 HUVEC的培养 HUVEC细胞株贴壁生长于含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中，置于5%CO2、37℃培养箱中培养，每2 d换液1次维持细胞良好生长状态。待细胞长至融合时用0.25%胰蛋白酶消化、传代。HUVEC呈多角形，单层铺路石样紧密排列。

1.3 不同浓度AngⅡ诱导HUVEC衰老 将细胞(2.5×104个/孔)接种于24孔板中，每孔加入普通全培养基1 ml培养过夜。……