王园园 刘 炯 李金辉 萧树东郑 青# 汪 铮#

上海交通大学医学院附属仁济医院消化内科 上海市消化疾病研究所1（200001）南京军区南京总医院消化内科2

细小病毒H-1是自主性细小病毒的主要代表之一，对肿瘤细胞和恶性转化细胞有选择性杀伤作用，而对正常细胞无影响[1]，有望成为新型的抗肿瘤制剂。多项实验已证实非结构蛋白NS1是细小病毒H-1发挥细胞毒作用的效应蛋白[1～3]。本课题前期研究[4]结果显示，低分化胃癌细胞对细小病毒H-1的细胞毒作用较为敏感，可能与细胞中NS1蛋白的产生和集聚能力增高有关。本研究利用成功构建的细小病毒H-1非结构蛋白NS1基因重组真核质粒为载体，旨在深入研究NS1基因对高分化胃癌细胞株MKN28、中分化胃癌细胞株SGC7901和低分化胃癌细胞株MKN45的影响，从而为进一步探讨NS1基因的抗肿瘤效应以及研究相关机制奠定基础。

材料与方法

一、质粒、细胞株和主要试剂

细小病毒H-1储存液由海德堡大学德国癌症研究中心（DKFZ）Rommelaere教授惠赠，细小病毒H-1非结构蛋白NS1基因真核表达质粒 pcDNA3.1-NS1由刘炯博士成功构建；真核表达质粒pcDNA3.1由金思特科技（南京）有限公司提供。不同分化程度的人胃癌细胞株 MKN28、SGC7901、MKN45由上海市消化疾病研究所冻存。质粒小提试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司，限制性内切酶、逆转录试剂盒、PCR试剂盒购自宝生物工程 （大连）有限公司，Unizol试剂（上海博星基因芯片有限责任公司），G418（Gibco，InvitrogenTMby Life Technologies），脂质体转染试剂LipofectamineTM2000（InvitrogenTMby Life Technologies），小鼠抗人 CD44单克隆抗体（BD 公司）。

二、方法

1.质粒抽提：分别将pcDNA3.1空质粒菌液和pcDNA3.1-NS1质粒菌液涂于氨苄西林（Amp）抗性的LB培养板，倒置于37℃培养箱内过夜培养。……