孙雪飞，裴艳涛，尹秋伟，杨国涛，吴铭生

(山东大学齐鲁医院，济南 250012)

藤梨根为软枣猕猴桃的根，味甘、咸寒、微涩，具有清热解毒、消肿疥、祛风湿的功效。既往常用于抗肿瘤治疗，尤其对消化道肿瘤疗效较佳。我们以往的研究发现，藤梨根乙酸乙酯提取物对体外培养的肺癌细胞有较好的抑制作用［1］。2009年10月～2010年5月，我们以此为基础，观察了藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用，并对其作用机制进行了探讨。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 肺癌A549细胞系由山东省医学科学院基础所惠赠。TUNEL试剂盒、SP免疫组化染色试剂盒、鼠抗人Survivin单克隆抗体均购自北京中山生物技术有限公司;RPMI 1640培养基、胎牛血清购自Gibco公司;溴化乙锭(BE)、胰蛋白酶为美国Sigma公司产品;捷达801系列形态学分析系统为江苏捷达科技发展有限公司产品;RNA提取液(TRIzol)购自Life Technologies公司;RT-PCR试剂盒购自TaKaRa公司;BioPhotometer型微量核酸定量仪为Eppendorf公司产品;MJ-PTC200 PCR仪为MJ research公司产品。藤梨根乙酸乙酯提取物自行制备。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养与分组 肺癌A549细胞培养在含10%小牛血清，青霉素及链霉素各100 U/ml的RPMI 1640培养液中，37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养，0.25%胰蛋白酶消化传代。以二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂，将藤梨根乙酸乙酯提取物浓度在临用前用RPMI 1640培养液分别配制为40、80、160 μg/ml，并以其浓度分组，为实验组;同时设对照组(0.04%DMSO+细胞)。取对数生长期的肺癌A549细胞用于实验。

1.2.2 肺癌A549细胞DNA裂解片断的检测 取肺癌A549细胞，调整细胞密度为5.0×105个/ml，接种于含RPMI 1640培养液的25 ml培养瓶中，每瓶3 ml。培养24 h后更换培养液，实验组分别加入40、80、160 μg/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物，并设对照组(0.04%DMSO+细胞)，CO2孵箱内培养48、72 h后，分别收集1×106个细胞，DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带。……