柴文戍，李 颖

(辽宁医学院附属第一医院，辽宁 锦州 121001)

铜绿假单胞菌(PA)是种植于支气管扩张、肺囊性纤维化和慢性阻塞性肺病患者下呼吸道的机会致病菌，可持续刺激宿主免疫反应导致进展性气道破坏，广泛存在于土壤、水及各种动物体内，具有多重耐药的特点［1］，一旦感染，临床治疗十分困难。肺巨噬细胞是肺组织细胞免疫的首道屏障，在肺部特异及非特异免疫系统中起重要作用。国内研究发现，PA 能诱导人类 U937 细胞发生凋亡［2，3］。随着细胞和分子生物学的发展，人们逐步认识到细胞周期不仅与细胞增殖直接相关，而且与细胞分化和凋亡有关［4］。然而，PA诱导J774细胞凋亡是否与细胞周期有关目前尚不清楚。2009年8月～2010年10月，我们通过流式单染技术检测细胞凋亡率和细胞周期，探讨PA感染宿主的发病机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 PA采用标准菌株ATCC27853，辽宁医学院第一附属医院检验中心惠赠，用LB培养基培养。J774巨噬细胞来源于鼠网状细胞肉瘤，由中国医学科学院协和医科大学基础医学研究所提供。培养基采用含10%FBS和100 U/ml庆大霉素的高糖型DMEM。Annexin V凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术有限公司，其他试剂均为进口或国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 细菌上清液的制备 在8 ml大豆肉汤培养基中通过振荡培养法(37℃，8 h)对PA进行增菌，5000 r/min 离心15 min 后，用孔径0.22 μm 的滤膜过滤，获得细菌上清液，最后灭火(56℃、1 h)，－20℃储存备用。

1.2.2 细菌感染细胞 将贴壁的J774细胞常规胰蛋白酶消化传代，接种于25 cm2的培养瓶中，置37℃、5%CO2培养箱中培养，隔2 d换液1次。……