林赠华，刘 红，姜胜华，陆 伟，宋国齐，李俊宏

(南通大学附属医院，江苏 南通 226001)

我们以往的研究发现，再生障碍性贫血(AA)患者血清中存在造血抑制物，其主要成分为干扰素-γ(IFN-γ)，可能通过影响JAK-STAT途径促进CD3+4细胞凋亡，从而导致AA的发病［1］，并且发现信号转导子和转录激活子3(Stat3)的磷酸化水平增高可能与重型再生障碍性贫血(SAA)患者造血干祖细胞过度凋亡有关［2］，但Stat3的磷酸化是否参与非重型再生障碍性贫血(NSAA)患者的造血功能衰竭尚不清楚。2009～2010年，我们通过观察NSAA患者血清孵育32D细胞过程中Stat3分子的磷酸化水平和细胞凋亡的变化，旨在探讨Stat3磷酸化在NSAA患者造血细胞过度凋亡中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院初治的、未行NSAA治疗(包括输血)的原发获得性NSAA患者12例，均符合《血液病诊断及疗效标准》(第3版)中的诊断标准。其中，男7例、女5例，年龄29～55岁。同期选择我院健康体检者12例作对照者，男7例、女5例，年龄28～57岁。两组患者性别、年龄具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 无菌条件下取NSAA患者及正常对照者外周静脉血5 ml，分离血清，56℃水浴30 min灭活补体，－20℃保存，用于培养32D细胞(由美国俄亥俄州Toledo大学惠赠);WEHI-3B细胞(由美国俄亥俄州Toledo大学惠赠)用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液培养，首次传代时弃掉培养液上清，第二次传代后培养5 d，1000 r/min离心5 min，收集所有上清(含32D细胞生长所需的IL-3)，经过滤后冻存;在RPMI 1640培养液中加入10%的IL-3和10%的对照组或NSAA组血清培养32D细胞，按所加血清不同分为对照组和NSAA组，在37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。

1.2.2 磷酸化Stat3蛋白(p-Stat3)和Stat3蛋白表达……