李 倩， 焦 燕， 彭 海

Gokkusu等研究表明同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)可以促炎症介质释放增加，导致内皮细胞损伤［1～3］，而后者是动脉粥样硬化的始动因素［4］。PPARs属于Ⅱ型核受体配体依赖转录因子超家族成员。近年的研究显示，在特定配体激活下，PPARs可以抑制炎性因子表达和炎症反应［5～7］。罗格列酮(Rosiglitazone，Ros)是PPARγ高亲和力的配体，有调节炎症反应的作用。本研究旨在观察罗格列酮是否对Hcy诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的损伤有保护作用以及对TNF-a和IL-6水平的影响。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 Hcy(Sigma公司);罗格列酮(浙江万马公司);兔抗人Bax抗体、兔抗人Bcl-2抗体及兔抗人Caspase-3抗体(武汉博士德);兔抗人PPARγ抗体(Cell Signing Technology);兔抗人β-actin和辣根酶标记鼠抗兔二抗(武汉博士德);TNF-α和IL-6试剂盒(武汉博士德)。

1.2 细胞培养 脐带取自华中科技大学附属协和医院产科健康产妇。PBS冲洗静脉腔，0.25%胰蛋白酶(trypsin)灌注消化(37℃，10min)，血清灭活，离心收集细胞团，转移至铺有0.2%明胶的T25培养瓶中，置于37℃，含5%体积分数CO2培养箱中培养。HUVECs培养液为含20%胎牛血清的DMEM培养基，细胞融合90%以上时用0.25g/L胰酶消化传代，第2～3代用做实验。

1.3 细胞分组及处理 HUVECs分为对照组(A组，DMEM培养基);实验组(B组，Hcy 100μmol/L);干预组(C组，Ros)，再根据不同浓度分为(C1:Hcy 100μmol/L+Ros10nmol/L)，(C2组:Hcy 100μmol/L+Ros 20nmol/L)(C3 组:Hcy 100μmol/L+Ros 30nmol/L)，各培养24h和48h。

1.4 MTT实验 HUVECs按每孔2×103个/ml的密度接种于96孔板中，每组5个复孔，试验重复3次。细胞贴壁后按实验分组加入试剂，48h后每孔避光加入5mg/ml MTT 50u L，混合均匀后置于37℃，含5%体积分数CO2，培养箱孵育4h后吸取上清液，每孔加入 DMSO 200μl，振荡10min。采用酶标仪测定各孔吸光度值(波长570nm处)。

1.5 免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达 取对数生长期HUVECs，按1×106/ml的密度接种于含有盖玻片的6孔板内进行爬片，待细胞长至盖玻片50%的时候，改换成用无血清的培养基继续培养24h，细胞饥饿24h，使细胞同步化于G0期。……