周辰珩， 金 莹， 洪 庆， 蔡海波， 臧秋玲

帕金森病(PD)是以震颤、强直、运动减少三大症状为临床表现的严重危害中老年人的神经系统变性疾病，其病因及发病机制至今尚未清楚。据报道线粒体功能紊乱与PD发病有关，环境中的有害化学物质可能通过抑制线粒体中电子转移系统中的复合物Ⅰ而影响PD的发病［1］。目前围绕其病因的争论很多，其中线粒体功能与PD的相关性研究是近年来研究的热点，本文针对编码线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ基因的3个位点突变进行研究。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取我院神经内科门诊散发性帕金森病患者88例，男性48例，女性40例，年龄44～78岁，平均(60.3±11.2)岁，符合英国帕金森病学会脑库的帕金森病临床诊断标准［2］。选取60例中老年健康体检者，男32例，女28例，无高血压，糖尿病病史，年龄46～76岁，平均(62.0±9.5)岁。两组的年龄、性别差异无显著性。

1.2 仪器和试剂

Bio-RAD My cyclerTM PCR仪(伯乐公司，美国);Bio-Rad Gel Doc 2000D凝胶成像仪(伯乐公司，美国);2720 Thermal Cycler PCR仪(ABI公司，美国);YY-6C型电泳仪(六一仪器厂，北京);5418型离心机(Eppendorf公司，德国);2×PCR mixture(Tiangen公司，瑞士);Maker(Ferments公司，德国);胶回收纯化试剂盒(AXYGEN公司，美国)。

1.3 方法

1.3.1 DNA样品制备 用酚/氯仿抽提法从研究对象外周静脉血白细胞中提取基因组DNA。

1.3.2 PCR引物设计与合成 引物由上海生工合成，引物设计参考文献［3］，见表1。

表1 三对线粒体NDA突变位点的PCR引物信息

1.3.3 PCR扩增 以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增。PCR反应体系总量25ml:上下游引物各 1.5ml，基因组 DNA 8ml，PCR mixture4μl，ddH2O10μl。PCR 条件:95℃预变性 5min，94℃变性30s，55℃退火 30s，72℃ 延伸 40s，循环数为 35 个，72℃延伸10min，10℃保存。PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定，并在自动凝胶成像系统上观察扩增结果。……