飞 翔， 锁志刚， 丁惠强， 唐晓杰， 樊 涛

基因调控的启动需要复杂而周密的信号转导系统，JAK2/STAT3信号转导通路是近年来备受关注的一条细胞内重要的信号转导途径，该途径是多种细胞因子和生长因子信号转导的共同通路，在细胞的增值、分化、凋亡以及免疫调节等过程中发挥着重要作用［1～3］。目前对脊髓损伤后信号通路的研究较少，JAK2/STAT3信号转导通路在ASCI后继发脊髓损伤中对细胞凋亡是否起调控作用未得到证实。本实验应用大鼠急性脊髓损伤模型，检测 JAK2/STAT3信号转导通路相关基因JAK2、STAT3的磷酸化水平及细胞凋亡执行基因caspase-3在ASCI后的表达变化。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂、仪器 健康成年雄性SD大鼠90只，体重225～275g，由宁夏医科大学实验动物中心提供。P-JAK2多克隆抗体(phospho-Try1007+Tyr1008)、P-STAT3多克隆抗体(phospho-Thr705)、Caspase-3多克隆抗体、过氧化物酶标记的链霉卵白素染色试剂盒(以上均购自北京博奥森生物技术有限公司)、DAB显色试剂盒(购自北京中杉金桥生物技术有限公司)、AG-490(购自美国Sigma公司)。全自动切片机(德国莱卡公司)、全自动染色仪、自动封片仪(德国MiCROM公司)、BMJ-Ⅲ型包埋机(常州中成电子仪器厂)、显微照相系统(日本OYLMPUS公司)。

1.2 脊髓损伤动物模型制备 应用Allen’s重物击落法并加改良制作大鼠急性脊髓损伤模型:大鼠实验前禁食8h，实验顺序随机进行。用3%的水合氯醛(27mg/100g)腹腔内注射麻醉，俯卧位固定，无菌操作。取胸背部正中切口，长约2.5cm，逐层切开皮肤及皮下组织，暴露T8-T10椎板，将T9全椎板切除，显露硬脊膜并使之保持完整，钳夹固定T8及T10棘突，用质量为10g的克氏针沿带有刻度的导管从25mm高处垂直自由下落，打击在直径4mm，宽2mm的由薄塑料材料制成的半圆片上，致伤后迅速移开打击物，造成大鼠脊髓不完全损伤，逐层缝合。……