金光明，郑寿焕

（延边大学附属医院，吉林 延吉 133000）

CD14是革兰氏阴性细菌的细胞壁成分——脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的受体，主要表达在单核巨噬细胞表面，它可通过脂多糖结合蛋白（lipopolysaccha-ride binding protein，LBS）与 LPS 特异性结合，并通过Toll样受体-4以及MD2蛋白向下游传递活化信号，启动单核-巨噬细胞系统（mononuclearphagocyte system，MPS），并释放多种细胞因子，通过促进基底膜增厚、增加细胞外基质和加剧肾小球的硬化[1-3]等多种途径引起糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）的发生。而 CD14启动子-159存在（C-T）的基因多态性，可以直接造成蛋白质生物学性状的改变。为了探讨CD14启动子-159的（C-T）多态性对延边地区朝鲜族DN患者发病的影响，笔者开展了本研究。

1 材料与方法

1.1 对象

随机选取本院接待的朝鲜族健康体检者139名：男性99名、女性40名，平均年龄（60.5±9.7）岁作为正常对照组，临床和实验室检查均正常，排除肝、肾、内分泌和心脑血管疾病；选取2005年12月～2009年12月在本院内分泌科住院的朝鲜族DN患者152例：男性83例、女性69例，平均年龄（55.3±6.8）岁。DN的诊断标准为：尿白蛋白排泄率（Urinary albumin excretion rate，UAER）＞20μg/min的糖尿病患者。两组在年龄和性别间的比较差异无显著性。

1.2 方法

1.2.1 基因组DNA提取 采用Promega公司生产的WizardRGenomicDNA Purification Kit提取DNA。取被检测对象肘静脉血3 mL到加有EDTA-Na2抗凝剂的真空采血管中，并立刻颠倒混匀。取300μL血样加入到1.5 mL Eppendorf离心管中，按照细胞裂解、核裂解、RNA去除、沉淀蛋白质、析出DNA、清洗DNA和水化DNA的过程分别加入试剂，进行DNA的提取。最后将所得的DNA经紫外分光光度计定量后于-70℃保存备用。

1.2.2 聚合酶链反应 所设计引物为：上游引物：5'-GCCTCTGACAGTTTATGTAATC-3'，下游引物：5'-GTGCCA ACAGATGAGGTTCAC-3'，由Promega公司合成。CD14的PCR扩增反应体系均为50μL，其中含 10×PCR缓冲液 5μL，2.5 mmol/L dNTP 5μL，上、下游引物各 1μL，模板 DNA 5μL，Taq DNA聚合酶0.5μL，不足体积用灭菌双蒸水补足至50μL。……