张琼敏，郑静，宋攀攀，朱翌，陈晓云，管敏鑫

（1.温州医学院附属第一医院 耳鼻咽喉科，浙江 温州 325000；2.温州医学院 生命科学学院，浙江 温州 325035）

位于高度保守的12S rRNA基因解码区的同质性A1555G和C1494T突变可导致其携带者对氨基糖甙类药物超敏感[1-4]。开展线粒体DNA A1555G和C1494T突变筛查，可从根本上减少对氨基糖甙类药物敏感的个体发生药物性耳聋。外周血作为基因检测的主来样本来源，具有基因含量丰富、存储方便等优点，然而抽血是有侵入性的操作，并且需要相应的人力物力才能完成。如果以血液作为唯一的基因来源势必会给基因筛查的实验研究及临床运用造成诸多不便。那么简易无损的口腔黏膜拭子是否可以取代血液完成药物性致聋基因的检测？其成功率与可靠性如何？本实验做了深入的研究。

1 材料和方法

1.1 对象及材料 温州特殊教育学校非综合征型耳聋学生97例（男57例，女40例，平均年龄13岁）。取被检者口腔黏膜拭子3根于信封中室温贮存，并取静脉血2 mL，EDTA抗凝于冰箱4 ℃贮存。以上工作均按照温州医学院伦理委员会管理规定，在患者及其家属成员签定知情同意书下完成。

1.2 试剂与器材 细胞裂解液（10 mmol/L Tris·HCl、1 mmol/L EDTA、0.1% SDS）、蛋白酶K、冰醋酸钾（3 mol/L KAC、5 mmol/L CH3COOH）、异丙醇、75%酒精，QIAamp DNA Mini Kit（50）（德国QIAGEN生物公司），Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0（大连宝生物工程有限公司），TaKaRa Ex Taq（大连宝生物工程有限公司），DL2，000TMDNA Marker（大连宝生物工程有限公司），Agarose Gel DNA Purification Kit Ver.2.0（大连宝生物工程有限公司），引物合成由大连宝生物工程有限公司完成。MyCycler Thermal Cycler 170-9703 PCR 扩增仪（BIO-RAD公司），DYY-III-8B稳压稳流型电泳仪（北京六一仪器厂），Gene Genius Bio imaging sys-tem紫外凝胶分析系统（SynGene公司），Thermo Scientific nanodrop2000spetrophotometer超微量分光光度计（北京星越生物科技有限公司），所有测序工作均由北京华大基因公司完成。……