于东明 王思谦 范媛媛 邓锦波△

河南大学医学院 1）神经生物学研究所 2）护理学院 开封 475004

Tg2576小鼠，即APPSWE转基因小鼠，是一种研究阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）病理变化及治疗的常用转基因动物模型。该模型鼠在Aβ的沉积、淀粉样斑块的形成、神经元退变和记忆丢失等方面表现出许多与AD患者的相似性［1－2］。对其子代鼠进行准确快速的基因鉴定，是该鼠保种、繁育以及进行下一步AD研究的基础。李国营等［3］采用的单一引物PCR来检测子代鼠的基因型和本实验室在实验中引入内源性参照引物β－actin以减少假阴性结果而采用的双重引物PCR鉴定基因型［4］，是目前对该转基因鼠基因型鉴定的常用方法。但是，无论单一引物或者双重引物PCR鉴定子代鼠的基因型，都是采用的酚／氯仿法提取DNA，该方法步骤繁琐，耗时较长。本研究借鉴煮沸裂解法制备质粒DNA方法，改进后用于提取Tg2576转基因小鼠体细胞DNA，力图建立一种快速、简便、高效的DNA提取方法，为进一步的AD实验研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂 APPSWE杂合子鼠（Tg2576，美国Taconic公司），购自南京大学模式动物研究所。待鉴定子代鼠，由雄性Tg2576与雌性C57BL／6小鼠交配而得。

2×PCR Mix、DNA marker DL2000购自广州东胜生物科技有限公司；PCR引物由上海生工生物技术有限公司合成；Du Red核酸染料（EB替代品）购于北京泛博生物化学有限公司；其他试剂为Sig ma产品或国产分析纯。

1.2 体细胞DNA的提取

1.2.1 酚／氯仿法：第1天：子鼠出生后10 d，剪0.5 cm 鼠尾置1.5 mL离心管内，编号。加0.5 mL DNA提取缓冲液（0.15%SDS、15 mmol／L NaCl，15 mmol／L Tris－HCl、15 mmol／L EDTA、20 mg／L 胰 RNA 酶），加5μL 10 mg／mL蛋白酶K，55℃消化过夜。

第2天：将消化好的组织充分摇匀；……