胡行前,周 雄,窦慧强,张科明,王 彤

(江苏省无锡市人民医院腔镜外科,江苏无锡,214000)

肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,死亡率高。早期诊断、早期治疗、根据不同病情进行综合治疗是提高疗效的关键,但总体疗效不甚理想,治疗失败和死亡的主要原因是肝癌细胞具有转移的特性。其中survivin、cappase-3、NF-kB等参与了肝癌发生、发展的调控[1]。最近研究发现[2],细胞外基质蛋白聚糖(Versican)参与细胞黏附、迁移、细胞通讯、增殖、血管生成等多种功能,在肿瘤浸润、转移机制中起到关键作用。本研究通过免疫组化方法对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及其癌旁组织测定Versican的表达水平,证实其在肿瘤中的高表达。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取本院2008年～2010年临床与病理资料完整的HCC患者标本40例(男30例,女10例;年龄41～67岁,平均59.4岁),另取相应癌旁0.5～1.0 cm内肝组织和肝血管瘤旁正常肝脏组织(9例)作为对照。所有标本均经过40 g/L甲醛固定,石蜡包埋,5 μ m 厚连续切片。

1.2 实验方法

试剂均购自上海索莱宝生物科技有限公司。采用免疫组织化学染色法(SP法),分别检测3组标本中Versican的表达情况,实验过程严格按照说明书操作。用已知阳性组织切片作阳性对照,每一个指标以PBS液代替一抗作阴性对照。

1.3 免疫组化结果评价标准

使用Leica Qwin病理图像分析系统,采用双盲法阅片。

Versican指标以细胞内特定部位出现黄色颗粒,染色强度高于背景的非特异性染色判定为阳性细胞。阳性结果参照文献进行肿瘤细胞阳性记分。选择10个高倍视野(×400)进行计数。根据染色程度和染色细胞百分率进行综合评分,染色程度按癌细胞着色的深浅记分为:基本不着色为0分,呈浅黄色1分,呈棕黄色为2分,呈棕褐色为3分;染色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分,6%～25%为1分,26%～50%为2分,≥51%为3分。将每张切片平均染色程度得分与平均染色细胞百分率得分各自相乘,得出该例标本的免疫组化的阳性分度:0～1分为阴性(-),2～3为(+),4～6分为( ),6分以上( )。

2 结 果

Versican阳性率肝癌组织明显高于癌旁组织(χ2=5.20,P<0.05)及肝正常组织(χ2=17.71,P<0.05),差异有统计学意义;癌旁组织高于肝正常组织(χ2=6.06,P<0.05),差异有统计学意义(表1)。

表1 Versican在肝癌组织、癌旁组织、肝正常组织中的表达

3 讨 论

Versican[3-4]是一种分子量很大的硫酸软骨素蛋白聚糖,由一个氨基端的G1亚基、一个羧基端的G3亚基和二者之间的GAG链结合区域所组成。G1区包含一个类免疫球蛋白基元、两个蛋白聚糖串联重复序列,又称透明质酸结合重复序列(HABR)。G3区则由两个类表皮生长因子重复序列、一个碳水化合物识别区域又称为类凝集素基元(CRD)及一个互补结合蛋白基元(CBP)所组成。GAG侧链在不同的组织和分子中都有所不同,根据GAG链结合区的不同可分为4个亚型V0、V1、V2和V3。Versican的不同亚型以及能与多种细胞因子结合决定了其功能多样性。

研究发现[5],增强的Versican表达已在多种不同的人类肿瘤中检测得到,包括乳房癌、前列腺癌、脑瘤、胃癌、肠癌和皮肤癌。多功能蛋白聚糖可与成纤维细胞生长因子、转化生长因子等多种因子结合在细胞黏附,迁移,增殖和分化过程中都发挥作用[6-7]。

研究人员发现[8-9],Versican通过Toll样受体TLR2和TLR6刺激宿主免疫系统中的炎性反应细胞,产生白介素-6和炎性蛋白 TNF-a,TNF-a能增强转移酶的功能,极大地促进癌细胞的转移生长。其中受体 TLR2和 TNF-a是Lewis肺癌(lewis lung carcinoma,LLC)转移的关键因素。Versican通过刺激炎症细胞活性来促进肿瘤转移。

本研究结果显示:Versican在HCC组织中阳性表达率72.5%,而在癌旁组织和肝正常组织的表达率分别为47.5%、22.2%,差异有统计学意义(P<0.05);在癌旁组织阳性表达率高于肝正常组织(P<0.05)。我们观察到Versican阳性表达主要位于癌细胞的胞质和核膜周围,偶见核内表达(图1)。这表明HCC组织中Versican呈异常高表达,并且接触越接近肿瘤浸润区域,Versican表达越高。提示Versican在HCC的发生发展中可能有重要作用,是预后的不良因子。但Versican阳性表达率是否与肝癌分化程度、有无门静脉浸润、肿瘤病灶的单发与多发、肿瘤直径等有关需进一步研究。

由此可见:①Versican在HCC中特异性高表达,在癌旁组织和肝正常组织的弱表达或者不表达,提示它参与了肝癌的发生与发展;②通过抢夺宿主免疫系统中的炎症因子,Versican建立了一个炎症环境,帮助癌症转移扩散[10]。Verscican、TLR2的拮抗剂可以抑制肿瘤细胞的活性,因此可以通过改变肿瘤细胞的微环境,来抑制肿瘤的扩散,为肿瘤的治疗提供一个新思路。

[1] 秦 安,王 彤.生存素(survivin)在肝癌治疗中的研究进展[J].中华肝胆外科杂志,2009,15(12):951.

[2] Wang W,Xu G L,Jia W D,et al.Ligation of T LR2 by versican:a link between inflammation and metastasis[J].Arch Med Res,2009,40(4):321.

[3] Du W W,Yang B B,Shatseva T A,et al.Versican G3 promotes mouse mammary tumor cell growth,mig ration,and metastasis by influencing EGF receptor signaling[J].PLoS One,2010,5(11):e13828.

[4] Ju H,Lim B,Kim M,et al.Genetic variants A1826H and D2937Y in GAG-beta domain of versican influence susceptibility to intestinal-type gastric cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol,2010,136(2):195.

[5] Cattaruzza S,Schiappacassi M,Kimata K,et a1.The globular domains of PG—M/versican modulate the proliferationapop-tosis equilibrium and invasive capabilities of tumor cells[J].FASEB J,2005,18(6):779.

[6] Kischel P,Waltregny D,Dumont B,et al.Versican overexpression in human breast cancer lesions:known and new isoforms for stromal tumor targeting[J].Int J Cancer,2010,126(3):640.

[7] Ricciardelli C,Sakko A J,Ween M P,et al.The biological role and regulation of versican levels in cancer[J].Cancer Metastasis Rev,2009,28(1-2):233.

[8] Kim S,Takahashi H,Lin WW,et al.Carcinoma-produced factors activate myeloid cells through T LR2 to stimulate metastasis[J].Nature,2009,457(7225):102.

[9] Domenzain-Reyna C,Hernández D,Miquel-Serra L,et al.Structure and regulation of the versican promoter:the versican promoter is regulated by AP-1 and TCF transcription factors in invasive human melanoma cells[J].J Biol Chem,2009,284(18):12306.

[10] Wang W,Xu G L,Jia W D,et al.Ligation of T LR2 by versican:a link between inflammation and metastasis[J].Arch M ed Res,2009,40(4):321.