周惠琼 张 清 叶 彬 孙晓萱 杨文芳



竞争性ELISA法测定软骨细胞蛋白聚糖代谢片段的可行性分析

周惠琼 张 清 叶 彬 孙晓萱 杨文芳

目的 本研究探讨竞争性ELISA法测定软骨细胞蛋白聚糖代谢片段的可行性，为蛋白聚糖相关研究提供一个新的方法。方法 利用单克隆抗体(Mab-5D4)通过竞争性ELISA 法检测体外培养的兔关节软骨细胞蛋白聚糖的代谢片段，摸索最佳实验条件，计算本方法的板间差异和板内差异，同时通过DMMB分光光度法测定蛋白聚糖的代谢物糖胺聚糖(GAG)，并比较它们的相关性。结果 竞争性ELISA法测定蛋白聚糖5D4片段方法的板间差异为10.38%，板内差异为3.91%，实验组培养上清液5D4片段的浓度明显高于对照组(328.22ng/ml vs 184.61ng/ml,t=5.67，P=0.001)。与常规分光光度法测定蛋白聚糖的代谢物GAG有较好的相关性(r=0.453～0.579，P=0.001)。结论 竞争性ELISA法测定蛋白聚糖代谢产物方法简便，重复性好，可应用于蛋白聚糖代谢的相关研究。

蛋白聚糖 ELISA 软骨细胞

软骨是关节的主要结构之一，蛋白聚糖(aggrecan)与Ⅱ型胶原同为关节软骨的主要成分，其中蛋白聚糖异常代谢是软骨病变的主要表现，常见的关节炎如骨关节炎(osteoarthritis,OA)及类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)都存在蛋白聚糖的异常代谢。既往蛋白聚糖的代谢研究常采用DMMB分光光度法测定蛋白聚糖的代谢物糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)来代表蛋白聚糖的降解，影响因素多，结果不稳定。近年来发现用针对蛋白聚糖代谢片段的单克隆抗体(Mab)通过ELISA法来检测蛋白聚糖的不同代谢片段，方法简单，重复性好，有一定的应用价值[1,2]。其中Mab-5D4 为一种识别蛋白聚糖代谢片段的单克隆抗体，它可与蛋白聚糖核心蛋白区的硫酸角质素(keratinsulphate，KS)链中重复出现的硫化七糖结合，所检测产物5D4片段是蛋白聚糖降解的标志物[3]。……