王慧艳,虞 斌,张雅英,江 华,杨宇奇,李 莉,陈 丽,钱琴玉

(江苏省常州市妇幼保健院,1.妇产科;2.实验室,江苏常州,213003)

胎盘可分泌参与血管新生和滋养层细胞功能调节的多种血管生长因子及其受体,其中血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)及其可溶性酪氨酸激酶受体(sFlt-1)在胎盘绒毛血管的生成和发育中具重要作用。近年来它们对子痫前期发病和预测中的作用引起了广泛的重视[1]。循环中血管生长因子的水平随着胎盘绒毛血管的发育和子宫胎盘血流的改变而改变。本研究观察正常孕妇随着孕周改变尿PLGF的自身动态变化,为研究病理妊娠如子痫前期的尿PLGF变化奠定基础。

1 资料与方法

2008年9月～2010年9月在常州市妇幼保健院进行正规产前检查的孕妇中,征募自愿参加研究的单胎初产妇200名,签署知情同意书;于孕12周进行定期产前检查,一般观察指标包括年龄、孕次、产次、体重、身高 、血压 、尿蛋白 、肝肾功能等常规产检内容,直至分娩后24h。同时收集这些孕妇在孕15～19周、孕 20～24周、孕 25～30周的随机尿样。在对这200名妇女尿样研究中,有73例因尿样不全或分娩信息丢失或出现妊娠合并症、并发症予剔除,其余127例均有3个尿样且分娩信息完整,无妊娠合并症和并发症,她们的平均年龄(27.28±2.42)岁,平均分娩孕周(39.68±1.09)周,新生儿平均出生体重(3340.20±357.32)g。

自孕15周始,每隔4～5周,收集孕妇随机尿10 mL,直至孕30周,标本经4℃低温离心后将其上清液置-80℃冰箱冻存待测。

采用ELISA检测尿液PLGF水平,试剂盒购自无锡雷赛科技生物有限公司,操作均按说明书进行。所有标本均行双复孔检测且为同批测定,均值为最终浓度,批内变异<5%。用意大利ALISA全自动酶免疫分析仪测定吸光度值D,波长为450 nm。

2 结 果

中晚孕期尿PLGF水平呈峰形,孕15周水平较低,随着孕周增加逐渐升高,孕23～24周达高峰(P<0.05)后逐渐下降(表1,图1)。

表1 不同孕周尿PLGF的浓度

3 讨 论

3.1 PLGF在胎盘形成和发育中的作用

PLGF最早于1991年由Maglione等[2]从人的胎盘cDNA文库中分离纯化而得。它是VEGF家族中的一员。胎盘的正常生长需要滋养叶细胞的充分浸润和胎儿胎盘血管网络的建立,所以胎盘组织所分泌的与血管新生和滋养叶细胞功能相关的生长因子在胎盘形成和发育中起到重要作用。PLGF丰富表达于胎盘,主要合成部位是滋养细胞,其特异性结合的受体位于血管内皮细胞和滋养细胞,这些特点使PLGF成为对滋养细胞功能有关键的自分泌作用和对血管生长有旁分泌作用的蛋白分子,从而引起人们的注意。正常妊娠胎盘形成早期,一方面滋养细胞经历了从细胞滋养细胞增殖活性向绒毛外滋养细胞浸润活性的转化,进而侵入母体螺旋小动脉使之转化为高流量、低阻力的子宫胎盘动脉,即血管重铸;另一方面,建立并维持有效的胎儿胎盘血管网络,这一过程包括血管新生,分枝及非分枝状血管生成。因此滋养叶细胞与内皮细胞在胎盘发育过程中存在着微妙的相互协调的关系,而这一关系的维持是局部生长因子作用的结果。

3.2 正常妊娠时PLGF的分泌变化

连续测定血清血管生成因子的浓度在孕妇的常规产前检查中是个挑战。研究发现[3-4],PLGF和VEGF易于过滤至尿中,尿中PLGF完全来源于血循环,但尿中VEGF主要来源于肾脏细胞本身(肾小球足突状细胞和肾小管细胞,故检测孕妇尿中PLGF水平是个可以替代抽血且侵入性更小的方法,易于为孕妇接受。参照 Levine等[5]在尿PLGF和子痫前期发生的危险中的研究结果,尿PLGF值与肌酐矫正后浓度(pg/mg)变化是一致的,随机尿和晨尿的改变是一致的,区别仅为晨尿与子痫前期发生的相关性更强些(OR值39.5 VS.13.5),故本研究采用随机尿测定尿PLGF浓度,未用肌酐值矫正。研究结果表明,尿PLGF水平在中晚孕期呈峰形,这种波动与胎盘的发育、血管重铸、供氧变化及PLGF生理功能相关。孕早期胚胎生长发育时,母体血对绒毛供给极少,处于相对缺氧状态,此时PLGF水平较低[6];随着胎盘的发育,在妊娠10～12周绒毛间血流建立,子宫动脉血流阻力下降显著,氧分压上升,PLGF水平亦随之上升;妊娠中期时,胎盘血流丰富、供氧充足,从23周始,胎盘绒毛间质细胞更多地向成熟中间型绒毛转换,胎盘血管生成也由分支结构向非分支结构转变,以形成最有效的母胎弥散交换的结构[7],而PLGF主要促进非分支血管的生成,故PLGF水平在该阶段达峰值;胎盘血管重铸在孕28周后速度趋缓,子宫动脉血流阻力下降幅度减小[8],从而下调PLGF的分泌,引起PLGF水平逐渐下降。

3.3 尿PLGF检测的意义

胎盘的正常发育对正常妊娠的维持至关重要。循环中血管内皮生成因子的失衡可导致病理妊娠如子痫前期、胎儿生长受限的发生。这些循环中血管生成蛋白的异常现象不仅出现在临床子痫前期,而且在子痫前期出现临床症状前数周就已存在。2004年Levine等[9]证实在子痫前期患者出现高血压、蛋白尿的临床表现前5周,胎盘分泌的内源性sFlt-1水平急剧升高,同时伴有促血管生成因子PLGF和VEGF水平下降。此后Levine等研究发现,子痫前期患者中,尿PLGF的改变在出现临床症状前与血压正常者相似,但在25～28周迅速下降,这种改变在早发型子痫前期和子痫前期并发小于孕龄儿中尤为明显,认为在中孕期下降的尿PLGF水平与随后较早发生的子痫前期关系密切。

[1] Lam C,Lim KH,Karumanchi SA.Circulating angiogenic factors in the pathogenesis and prediction of preeclampsia[J].Hypertension,2005,46(5):1077.

[2] Cao Y,Ji W R,Qi P,et al.Placenta growth factor:identification and characterization of a novel isoform generated by RNA alternative splicing[J].Biochem Biophys Res Commun,1997,235(3):493.

[3] Simon M,Grone H J,Johren O,et al.Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors in human renal ontogenesis and in adult kidney[J].Am J Physiol,1995,268(2 pt 2):240.

[4] Brown L F,Berse B,Tognazzi K,et al.Vascular permeability factor mRNA and protein expression in human kidney[J].Kidney Int,1992,42(6):1457.

[5] Levine R J,Thadhani R,Qian C,et al.Urinary placental growth factor and risk of preeclampsia[J].JAMA,2005,293(15):1857.

[6] AhmedA,Dunk C,Ahmad S,et a1.Regulation of placental vascular endothelial growth factor(VEGF)and placental growth factor(PGF)and soluble Fit-1 by oxygen:a review[J].Placenta,2000,21(suppl A):S16.

[7] Castellucci M,Kosanke G,Verdenelli F,et al.Villous sprouting:fundamental mechanisms of human placental development[J].Human Reproduction Update,2000,6(5):485.

[8] 刘伟,林其德,夏建国.正常孕妇和子痫前期患者子宫动脉血流阻力的研究[J].上海交通大学学报:医学版,2006,26(12):1373.

[9] Levine R J,Maynard S E,Qian C,et al.Circulating angiogenic factorsand the risk of preeclampsia[J].N Engl J Med,2004,350(7):672.