吴明彩，蒋 明，李大彩，毕富勇

(1.皖南医学院 生物化学教研室，安徽 芜湖 241002;2.第二炮兵芜湖鸠江干休所 卫生所，安徽 芜湖 241000)

DNA甲基化被认为是肿瘤形成的重要机制之一，抑癌基因可因高度甲基化而失活，这种基因沉默调控与体细胞突变共同促进了肿瘤的发展［1］。人类RUNX3(runt-related transcription factor 3)是一种新型的抑癌基因，位于1号染色体的1p36.1［2］，已在人类多种实体瘤中发现存在RUNX3启动子区的异常甲基化，而急性白血病中该基因的甲基化状态的研究尚处于探索阶段。本实验选用白血病Reh细胞株为研究对象，进行体外培养，采用MTT、MSP以及RT-PCR方法检测5-氮-2'脱氧胞苷对Reh细胞生长增殖、RUNX3基因启动子区甲基化状态及表达的影响，探讨去甲基化制剂对Reh细胞增殖及其RUNX3基因表达的调控作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂与药品 RPMI 1640培养基(上海生工);胎牛血清(BIO CHROM);DNA提取试剂盒(Promega公司);DNA甲基化试剂盒(Qiagen公司);Trizol试剂(上海生工);PCR试剂盒(Promega公司);RT-PCR(Promega公司);DNA Marker(上海生工);琼脂糖(西班牙进口);DNaseⅠ(上海生工)。引物由上海生工公司合成。

1.1.2 细胞培养 人白血病细胞系Reh购自中科院上海细胞库(ATCC建系)。Reh细胞于 RPMI 1640培养基(含10%胎牛血清)，37℃、5%CO2、饱和湿度CO2培养箱中孵育，倒置显微镜下观察细胞生长情况。将细胞以适宜密度接种，加入含5-氮-2'脱氧胞苷的RPMI 1640培养基，使其药物最终浓度分别为0.5、2.5、12.5 μmol/L，每 24 h 更换新鲜药液，药物浓度同前，连续作用3 d后弃去药液，以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基继续培养5 d，以未加药物的细胞株作为对照组。

1.2 方法

1.2.1 MTT试验(四唑盐比色分析法) 上述经不同浓度药物处理3 d后的Reh细……