杨志超 张丽莉 卢翠华* 邸 宏 姜丽丽 张正国 林忠平胡鸢雷

（1东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨 150030；2北京大学生命科学学院，北京 100871）

马铃薯（Solanum tuberosumL.）是茄科茄属双子叶植物，是世界四大粮食作物之一，由于它具有适应性强、产量高、营养成分全和加工产业链长等特点，受到了全世界的广泛重视。我国是世界马铃薯生产第一大国，面积和总产量占全世界的1/4（卢翠华 等，2009）。

虫害是造成马铃薯减产的主要原因，其中金龟子科害虫金龟子（幼虫俗称蛴螬）是世界范围内广泛分布的地下害虫之一。金龟子成虫、幼虫均可危害马铃薯，但幼虫危害较大。传统化学药剂防治不仅危害人类健康，而且造成环境污染（姚庆学 等，2003）。自1996年转基因作物商业化以来，全球种植的抗虫转基因作物面积已经达到2 625万hm2（James，2008）。其中对金龟子科害虫具有杀虫作用的苏云金芽胞杆菌cry类基因的相继发现和克隆，为害虫的防治提供了新的途径。Yu等（2006）从Bt185中克隆了P2300-pa-8ea1基因。

本试验将来源于Bt菌株Bt185的P2300-pa-8e基因导入马铃薯中，期望获得抗虫的马铃薯材料，为马铃薯抗性育种提供新资源。

1 材料与方法

1.1 试验材料和菌株

试验于2009年7月～2010年5月在东北农业大学马铃薯实验室进行。

供试马铃薯品种为早大白和克新18号（东北农业大学提供）。

供试农杆菌菌种为LBA4404（北京大学生命科学学院提供），植物表达载体质粒P2300-Pa-8e（图1），利用Patatin启动子驱动P2300-pa-8e（500 bp）基因的表达，质粒由北京大学生命科学学院林中平教授提供。

1.2 试验方法

1.2.1 工程菌液的制备 挑取含有质粒P2300-Pa-8e的农杆菌LBA4404单菌落接种于含有卡那霉素（Kan）、链霉素（Str）和利福平（Rif）的YEB培养基中，避光震荡培养。……