南栗岩 齐 玲 肖振晶 赵庆旭 王 伟 于洪泉 (吉化集团公司总医院药剂科，吉林 吉林 30)

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族中的一员，作为肿瘤治疗的新药，在美国已进入临床Ⅱ期试验阶段〔1〕。但由于在肿瘤治疗研究中，TRAIL一直存在治疗抵抗，因此，本文对原代培养的恶性胶质瘤细胞进行研究，通过观察TRAIL的两种受体——死亡受体(DR)4、DR5在恶性胶质瘤细胞中的表达，探讨在原代培养肿瘤细胞中存在的TRAIL抵抗问题。

1 材料与方法

1.1 细胞培养〔2〕取新鲜人脑胶质瘤组织(吉林大学第一医院提供，病理诊断为Ⅲ～Ⅳ级脑胶质瘤)。将组织剪成小块(1 mm×1 mm)，置于离心管中，加入0.25%胰酶，37℃恒温水浴中孵育30 min，离心后弃上清，培养液重悬细胞，苔盼蓝计数活细胞，加入10%DMEM/F12(Gibco)培养液，以1×106个/75 cm2密度接种细胞，将培养瓶置入37℃、5%CO2孵箱、饱和湿度下进行培养，隔日换液，1∶3传代，获得3株恶性胶质瘤细胞株(GC417、GC321、GC125)。

1.2 免疫印迹检测恶性胶质瘤细胞中神经分裂症断裂基因(DISC)成分的表达〔3〕将细胞培养3 d，待细胞生长90%左右，弃培养液，磷酸盐缓冲液(PBS)充分洗涤细胞，弃PBS，0.25%胰酶消化，将细胞收集于1.5 ml离心管中，3 000 r/min离心5min，弃上清。PBS充分洗涤细胞，离心弃上清，每个样品加入50 μl的细胞裂解液，细胞充分裂解后，12 000 r/min 4℃离心15 min，上清移于另一管中，弃沉淀，Braford法检测样品蛋白浓度，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)跑胶分离样品，4℃转膜封闭后，加入相应一抗〔兔抗人死亡受体(DR)5多克隆抗体;兔抗人DR4多克隆抗体;兔抗人β-actin多克隆抗体;1∶1 000〕4℃孵育过夜。加入相应的二抗，室温、避光孵育1 h，胶片曝光拍照。……