范晓艳 刘 娜 金岳雷 朱金玲 吕冬霞 (佳木斯大学基础医学院，黑龙江 佳木斯 54007)

化疗是宫颈癌较为传统的治疗方法，传统的化疗药物有不同程度的毒副作用，长期应用后其毒副作用给患者带来极大的痛苦甚至危及生命〔1～3〕。寻找毒性小、药物不良反应少且有一定疗效的药物治疗肿瘤成为肿瘤治疗的途径之一。研究表明，灰树花多糖(Polysaccharide of grifola frondosa，PGF)具有稳定血压、降低血糖、改善脂肪代谢、增强免疫功能、抑制肿瘤、抗HIV病毒等生理活性〔4〕。本实验探讨PGF对HeLa细胞凋亡的影响，为抗肿瘤天然药物的开发和利用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 人宫颈癌HeLa细胞购于武汉大学典型培养物冷藏中心。净化工作台(苏州净化设备厂)，二氧化碳培养箱(美国)，倒置相差显微镜(日本)，酶标仪(LABSYSTEMS)，小牛血清、RPMI-1640培养液(杭州四季青)，二甲基亚砜(DMSO)、噻唑蓝(MTT)(上海普飞生物技术有限公司)，PGF粉末(浙江方格药业有限公司)，顺铂粉剂(山东齐鲁制药厂)，半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)免疫组化试剂盒(武汉博士德生物公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞的培养和传代 配制含10%灭活小牛血清的RPMI-1640完全培养液。将宫颈癌HeLa细胞按1×105个/ml的浓度分别接种在含完全培养液的培养瓶内，5%CO2，37℃饱和湿度培养箱内培养。2～3 d传代一次，所有实验均在细胞处于对数生长期进行。

1.2.2 药物配制 供试药物均用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配制。PGF设 3个浓度:0.01、0.05、0.10 mg/L。顺铂:1 mg/L。

1.2.3 MTT法检测细胞抑制率 将对数生长期的HeLa细胞按1×104个/ml的密度移入96孔培养板，每孔加入200 μl细胞悬液，37℃、5%CO2的培养箱中培养。24 h后，弃去原培养液，每孔加入不同浓度的 PGF溶液200 μl，其终浓度分别为0.01、0.05、0.10 mg/L;空白对照组中仅加10%小牛血清的RPMI-1640培养液。……