董文辉 吕玉人 刘永茂 (民航总医院妇产科，北京 00025)

环氧合酶(COX)是花生四烯酸代谢过程中前列腺素(PGS)合成的限速酶〔1〕，有 COX-1 和 COX-2 两种同工酶〔2〕。近年研究发现宫颈癌细胞中COX-2表达。塞来昔布(celecoxib)是第一个高效的COX-2特异性抑制剂〔3〕，对肿瘤的发生、发展和转移均有抑制作用。本研究旨在观察塞来昔布对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响，并进一步探讨塞来昔布影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用机制。

1 材料与方法

1.1 细胞株及材料 人宫颈癌Hela细胞购自中科院上海细胞所，塞来昔布购自美国辉瑞公司(BK10CCEE069)，四甲基耦氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)购自美国Sigma公司，RPMI-1640购自美国Hyclone公司。

1.2 仪器 37℃恒温空气摇床(上海医疗器械厂)，低温高速离心机(德国宝丽曼公司)，80I荧光显微镜(日本尼康公司)，-80℃冰箱(日本三洋公司)，LD-5台式离心机(北京六一仪器厂)，SM-510高压灭菌锅(美国YAMATO公司)，电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)，pH计(上海精密仪器公司)，磁力搅拌器(上海精密仪器公司)，SW-CJ-1 FD超净工作台(深圳市铭科化工有限公司)，倒置显微镜(日本Olympus公司)，MCO-175型CO2孵箱(日本三洋公司)，BCD-2398TC冰箱(青岛海尔股份有限公司)，75 cm2细胞培养瓶斜口、24孔板，Nunclon细胞培养板(丹麦Nunc公司)。

1.3 方法

1.3.1 塞来昔布配制 取胶囊1粒(含塞来昔布200 mg)，加入20 ml含少量DMSO的生理盐水充分搅拌成混悬液，现用现配。0.22 μm滤膜除菌，再用 RPMI-1640培养液稀释80倍(320 μmol/L)备用。

1.3.2 细胞培养 人宫颈癌Hela细胞接种于细胞培养瓶中，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液置于5%CO2的37℃培养箱中培养，待其贴壁生长至70% ～80%时用0.25%胰蛋白酶消化传代，2～3 d传代1次。

1.3.3 Hela细胞塞来昔布体外诱导 将处于指数生长期的Hela细胞，用含10%新生牛血清的 IMDM制成5×104个细胞/L细胞悬液，每孔100 μl接种于96孔板孔内。……