于 敏 孙红霞 (北华大学附属医院心内科,吉林 吉林 132013)

心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)以心肌成纤维细胞(CFb)过度增殖、胶原蛋白分泌增加为主要特征,并参与心室重塑。近年来大量资料揭示,转化生长因子-β1(TGF-β1)参与了 MF的发生、发展,其表达增多与 MF密切相关〔1,2〕。目前研究发现,依那普利拉(Ena)除具有降低血压、改善心肌供血、治疗心肌梗死等作用外,还具有抑制血管平滑肌细胞和CFb增生〔3〕的作用,其作用机制尚有待进一步研究。本实验在细胞水平上观察 Ena对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导CFb增殖、羟脯氨酸含量变化及对 TGF-β1转录和表达的影响,旨在探讨其抗MF的作用及机制。

1 材资料与方法

1.1 材料与细胞 Ena购自江苏常州制药厂;胰蛋白酶:宝泰克生物试剂;AngⅡ、四氮唑盐(MTT)均为 Sigma公司产品;IMDM培养基购自HyClone Utah公司;胎牛血清(FCS):杭州四季青;Heraeus型CO2培养箱;SUNRISE TECAN FO39300型自动酶联检测仪(澳大利亚);日本Olympus倒置显微镜;超净工作台。鼠TGF-β1cDNA序列取自 Gen Bank(NO:X76881),上游引物序列:CTTCAGCTCCACAGAGAAGAACTGC,下游引物序列CACGATCATGTTGGACAACTGCTCC,扩增的PCR产物大小为290 bp。所有引物序列均采用序列局部相似性查询系统(BLAST)软件分析,由上海生物工程公司合成;总RNA提取试剂盒,RT-PCR试剂盒:Promega;TGF-β1,S-P免疫组化试剂盒:福州迈新。出生1～3 d的 Wistar大鼠取心室,胰酶消化,收集细胞,置于含100 ml/L FCS的IMDM培养液中,在50 ml/L CO2、37℃、饱和湿度条件下培养60～90 min。采用差速贴壁法分离CFb,加入含100 ml/L FCS的IMDM继续培养。经倒置显微镜、透射电镜、免疫组化纤维黏连蛋白染色阳性和平滑肌肌动蛋白染色阴性鉴定为所需的CFb,纯度达98%,生长近融合时按1∶3传代,实验采用2～4代细胞。

1.2 方法

1.2.1 分组 共分为五组,对照组:含有IMDM的培养……