王柏欣 阮 洋 贾秀月 陈 梅 王 昕 邱洪斌 王淑秋 (佳木斯大学,黑龙江 佳木斯 54007)

辛伐他汀是一种羟甲基戊二酰辅酶A(HMG-COA)还原酶抑制剂,能减少胆固醇的生物合成,是一种临床上广泛使用的降血脂药物。最近实验发现辛伐他汀能减轻脑缺血再灌注损伤,但其机制尚未完全阐明。本课题拟观察脑缺血再灌注损伤后大鼠脑组织中神经生长因子(NGF),GAP-43,巢蛋白(Nestin)的表达,旨在探讨辛伐他汀对脑缺血再灌注的保护作用及机制,并为探索神经损伤修复机制及筛选新药、建立新的脑损伤治疗方法奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 动物及分组 健康成年Wistar大鼠,250～300 g,随机分为正常组、假手术组、模型组,辛伐他汀组。模型组和辛伐他汀组都应用线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血时间为30 min,再灌注时间分别为 1、2、3、5、7 d,每个时间点 6 只大鼠。辛伐他汀组在术后第1天开始,予辛伐他汀20 mg/kg灌胃;假手术组及缺血再灌注模型组用相同体积的等渗盐水灌胃,正常组正常喂养。

1.2 试剂 辛伐他汀由浙江京新药业股份有限公司提供;FITC标记二抗,NGF、GAP-43、Nestin一抗由上海沪峰生物试剂公司提供;辣根过氧化酶标记二抗,β-actin,由北京中杉提供;预染蛋白Marker由 Fermentas公司提供;PVDF膜由美国Millipore公司提供;ECL发光试剂盒,BCA蛋白浓度检测试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 建立脑缺血再灌注模型 根据大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型。称重,10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉;将动物仰卧位固定(上门齿、四肢远端用粗线……