杜庆聪 裴艳涛 杨国涛 孙雪飞 尹秋伟 吴铭生 (山东大学齐鲁医院胸外科,山东 济南 25002)

藤梨根为猕猴桃科猕猴桃属软枣猕猴桃的根,味甘、咸寒、微涩,具有清热解毒、消肿疥、祛风湿的功效。临床上常用于抗肿瘤治疗,尤其对消化道肿瘤疗效较佳。近年研究发现,藤梨根提取物体外对多种肿瘤有抑制作用。不同方法萃取的提取物对肿瘤的抑制效果不同,有研究显示藤梨根乙酸乙酯提取物抗肿瘤效果较佳〔1〕。有关藤梨根对肺癌的作用尚未见报道。本研究以肺腺癌A549细胞系作为研究对象,观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞系与细胞培养 肺癌A549细胞系由山东省医学科学院基础所惠赠。培养在含10%小牛血清,青霉素及链霉素各100 U/ml的 RPMI 1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养,0.25%胰蛋白酶消化传代。

1.1.2 藤梨根乙酸乙酯提取物的制备 将藤梨根(购自济南建联药店)500 g粉碎成20目的粗粉→加8倍水煮2次,每次1 h;过滤浓缩→加入乙酸乙酯溶媒萃取3次(每次300 ml)→回收溶媒,得浓缩物约25 g(含三萜类物质)→蒸馏水热溶→过滤→滤液供实验用(无菌)。

1.1.3 主要仪器和试剂 RPMI 1640培养液(美国Gibco公司),小牛血清(美国 Hyclone公司),四唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶均购自美国 Sigma公司。全自动CO2孵箱(美国杜邦公司 Napoc6100),倒置显微镜(日产Olympus,ZMT-413),450型酶标仪(美国BioRad生产)。鼠抗人Ki-67单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒、正常山羊血清购自北京中山生物技术有限公司;标记脱氧嘧啶核苷酸(3H-TdR)(北京原子能研究所);LKB-1217液体闪烁计数器(瑞典产品)。……