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(1南京中医药大学,南京 210029;2南京中医药大学第一附属医院)

Janus激酶(JAK)是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶。JAK2是 JAK家族中受到高度关注的一员,其广泛分布于体细胞的胞质中,参与造血和免疫等系统的信号转导。多项研究[1～5]证实,真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF)等疾病中存在 JAK2激酶 V 617F点突变。该突变位点在 DNA序列的第 1 849位碱基,由胸腺嘧啶代替了原有的鸟嘌呤(G→T),导致编码蛋白第 617位的苯丙氨酸被缬氨酸代替,引起该基因编码的酪氨酸激酶活性增高。研究证实[6],JAK2 V617F是发生于干细胞水平的突变,是 PV、ET等骨髓增殖性肿瘤(MPN)的主要分子致病机制和诊断标志。 2007年 11月～2010年 11月,本研究分析了 JAK2基因 V617F点突变在 MPN患者中的发生情况,探讨其在 MPN诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 临床血液病送检样本 100例,男59例,女 41例,年龄 11～83岁。其中 PV(PV?)20例,有红细胞增多但尚未明确诊断为 PV者 10例,ET(ET?)14例,有血小板增多但尚未明确诊断为ET者 13例,原发性骨髓纤维化(PMF)9例,慢性髓性白血病(CML)2例,其他 MPN 6例,其他不明原因白细胞升高患者 8例;另有急性白血病(AML)1例,骨髓增生异常综合征(MDS)10例,腔隙性梗死3例,慢性肾炎 1例,大 B细胞性淋巴瘤 1例,异体胎肝移植患者 1例,正常体检者 1例。样本中 91例为抗凝血,8例为石蜡包埋骨穿组织学检测样本,1例为骨穿送检骨髓液。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取 用 OMEGA bio-tek血液 DNA提取试剂盒及组织 DNA提取试剂盒,按照说明书操作。用 eppendorf核酸定量仪选择 dsDNA为测定目标测定 DNA浓度,要求样本 260 nm吸光率大于0.05,DNA浓度大于 2.0μg/μl。

1.2.2 PCR扩增 ①PCR引物:检索 NCBIJAK2基因序列设计的第 12,14外显子特异性引物两对,由上海生工公司合成。……