朱艳芬 宋泽庆 (广东医学院附属医院呼吸内科,湛江524000)

气道重塑是哮喘的重要特征,与重症哮喘密切相关,特征性改变是上皮下纤维化和气道平滑肌细胞(Airway Smooth Muscle Cells,ASMC)增生肥大[1,2]。气道重塑一旦形成难以可逆,目前临床上尚缺乏简单可行的检测和治疗方法,所以气道重塑成为哮喘防治的难点和重点。α-SMA是肌纤维细胞亚类之一,也是平滑肌的主要标志物,可反映平滑肌数量及其收缩能力,具有收缩潜能和较强的胶原合成能力,可导致管腔收缩狭窄,哮喘发作。α-SMA表达增加可能与哮喘气道重塑,哮喘症状发作有密切关系。本研究旨在探讨人类主要过敏原屋尘螨提取液(House Dust Mite Extract,HDM)诱导的小鼠哮喘模型中肺组织中α-SMA与哮喘气道重塑的关系,为临床支气管哮喘诊治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物及主要试剂 6～8周雌性SPF级BALB/c小鼠广东医学院实验动物中心提供,合格证号2008A040。标准化的HDM,购自丹麦ALK公司,产品号ALK(503),主要成分是Derp1和Derp2,含量为1×108U/L。兔抗小鼠α-SMA多克隆抗体、免疫组化超敏SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司;PCR 引物 、GAPDH 内参、Trizol、RT-PCR Kit、SYBR Green PCRMaster Mix等购自宝生物工程(大连)有限公司。

1.2 动物分组 SPF级雌性BALB/c小鼠90只,体质量(18±2)克,随机分为空白对照组、HDM 低剂量组和HDM 高剂量组,每组再分为 3、6、9周三个亚组,每亚组均为10只动物。

1.3 致敏和激发步骤 参考Ahn的模型构造方法[3],并做适当调整。HDM低剂量组和HDM高剂量组分别用含2%氢氧化铝2×106U/L HDM和2%氢氧化铝4×106U/LHDM 0.05ml,第1天皮下注射致敏小鼠,第8、15天腹腔注射同样浓度和剂量的HDM。第17天开始,用1%戊巴比妥0.15 ml腹腔注射麻醉小鼠后,HDM低剂量组用2×106U/L和HDM高剂量组用4×106U/L的HDM 0.05 ml缓慢滴鼻激发,每周一、三、五共3次。……