孙大康 安新业 李 勐 周晓生 (滨州医学院临床学院,滨州256603)

目前在人类已发现70多种Trim(Tripartite motif,三基序)家族成员,其具有重要的抗病毒作用,并参与细胞的增殖、分化、肿瘤发生、凋亡及转录等方面的调节[1,2]。IFN(Interferon,干扰素)可以诱导Trim5α、Trim6、Trim 19、Trim21、Trim22 等多种Trim 蛋白在巨噬细胞或淋巴细胞的表达[3]。有意思的是,Trim22可以影响HIV-1病毒复制的多个环节,抑制病毒颗粒的产生。HIV-1的gag基因产生55 kD的衣壳蛋白前体p55,p55由病毒编码的一个蛋白酶切成四个小蛋白:MA(p17基质)、CA(p24衣壳)、NC(p9核衣壳)和p6。Trim22能与HIV的衣壳蛋白结合,抑制HIV病毒颗粒的形成[4]。在HIV感染细胞模型中过表达Trim22之后,发现HIV的衣壳蛋白弥散地分布于胞浆中,不能正常地定向转移至细胞膜附近,从而抑制HIV的出芽过程[4]。目前虽然已有商品化的抗Trim22抗体,但抗体效价较低。同时,Trim家族成员之间同源性很高,用外源性Trim22全长蛋白作为抗原免疫动物,制备得到的抗体特异性并不理想。通过生物信息学分析,我们选取“382KSSGFAFDPSVNYSKV397”作为抗原表位,人工合成多肽与BSA偶联后作为免疫原,制备抗Trim22多克隆抗体,这对于研究内源性Trim22与HIV-1衣壳蛋白及其前体相互作用的分子机制具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料 HEK293T细胞株为本室保存;健康雄性新西兰大白兔均由本院实验动物中心提供;福氏佐剂购自Sigma公司;Lipofectamine、Opti-MEM 无血清培养基购自Invitrogen公司;DMEM购自Gibco公司;FLAG鼠源单抗、抗人actin兔源多抗购自Sigma公司;HRP标记的二抗anti-rabbit IgG购自Southern Biotechnology Associates公司;HRP标记的二抗anti-mouse IgG购自R&D公司;硝酸纤维素膜(NC)购自BIO-RAD公司;ECLPlus购自Thermo公司,多肽由吉尔生化(上海)有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 Trim22合成肽的设……