朱思思 赵肃清 李月明 温俊林 (广东工业大学轻工化工学院,广州510006)

肠道病毒71型是细小RNA病毒科,肠道病毒属,自1974年首次报道以来,已在全世界范围内多次爆发和流行[1,2]。EV71感染除了能引起手足口病(Hand-foot-and-mouth disease,HFMD)外,还能引起一系列神经系统相关的严重疾病如脑干脑炎、无菌性脑膜炎和脊髓灰质炎样的麻痹[3]。然而目前针对肠道病毒EV71感染仍没有有效的预防疫苗及治疗特效药。近年来,卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin Y,IgY)因其具有经济、安全、制备方便、稳定性好等优点而成为当今生物科学研究的一个热点[4]。IgY抗体在动物与人的被动免疫保护方面的应用引起了广泛的关注。国内外已有一些关于抗猪繁殖与呼吸综合症病毒、抗流感病毒、抗甲肝病毒IgY抗体的研究报道[5-7]。本研究的目的在于制备与鉴定特异性抗EV71病毒的IgY抗体并检测其生物学性能,为EV71感染手足口病的预防和治疗奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器与试剂 高速冷冻离心Allegra TM 64R Centrifuge(Beckman,America);酶标分析仪Tecan infinite 200(Tecan,Switzerland);生物安全柜NE-430-600E(NUAIRE,America);真空冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司);HRP标记山羊抗鸡IgY二抗为Promega公司产品;弗氏佐剂(Freund's adjuvant)、四甲基联苯胺(Tetrabenzidine,TMB)购自Sigma公司;胎牛血清、DMEM培养基均为Gibco公司产品;CsCl为MERCK公司产品;PEG6000为日产购自广东国奥生物科技公司;其他试剂为国产分析纯。

1.1.2 实验动物 广州太和良田养鸡场健康产蛋母鸡4只,未经任何免疫,正常饲养。

1.1.3 实验抗原 EV71肠道病毒广东惠州株由广东省疾病预防控制中心提供。

1.2 方法

1.2.1 抗原的纯化 将EV71病毒株接种到生长至单层的横纹肌肉瘤细胞RD细胞中,CO2培养箱中培养至90%左右细胞出现细胞病变CPE时收获,-20℃冻融3次,4℃,10 000 r/min离心90分钟,收集上清液。……