胡玲玲 陈昌友 张益红 郭静雅 陆海波 旬神美 邱玉华

(南京医科大学第二附属医院检验科,南京210011)

CD28分子是表达在T细胞表面的重要共刺激分子,是由两条44 kD多肽链以二硫键连接而成的同源二聚体,为Ⅰ型跨膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族(IgSF)成员。CD28分子与B7-1或B7-2结合可为T细胞活化和增殖提供共刺激信号,从而引发免疫应答[1]。鼠抗人CD28单克隆抗体2F5与T细胞表面CD28分子交联形成多聚化后,产生类似于天然配基B7分子的作用,可促进T细胞活化、增殖与分化,从而介导免疫效应[2]。近年来,利用抗CD28单抗单独或联合抗CD3单抗或细胞因子IL-2等扩增肿瘤特异性T细胞(CTL)的研究正日益深入[3-5]。肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)与抗CD28单抗共培养后,Foxp3+Treg的比例下调,提示该抗体能够使肿瘤患者的免疫功能得到一定程度的恢复与提高[6]。研究表明,抗CD28特异性单链抗体可活化肿瘤特异性T细胞,进而抑制肿瘤细胞的增长[7]。本研究在已成功研制了鼠抗人CD28单克隆抗体的基础上,观察2F5对人恶性T淋巴瘤细胞株Jurkat体外增殖的抑制效果;建立裸鼠T淋巴细胞瘤动物模型,探讨其对T淋巴瘤的体内抗肿瘤效应。

1 材料与方法

1.1 实验试剂、仪器、细胞株及动物 鼠抗人CD28抗体2F5由本室研制并保存;PE标记的羊抗鼠IgG(Fc;BD,美国);MTT(Sigma,美国);RPMI1640 基础培养基(Gibco,美国);CO2培养箱、离心机(Jouan,法国);倒置显微镜 (Olympus,日本);流式细胞仪(Beckman-Coulter,美国);550型酶标仪(Bio-rad,美国);人恶性 T淋巴瘤细胞株 Jurkat购自ATCC;BALB/c裸鼠(上海斯耐克动物中心,中国)。

1.2 鼠抗人CD28单抗 2F5对 Jurkat细胞膜型CD28分子的识别 收集生长良好的Jurkat细胞,用含1%BSA的PBS洗涤1次,调整细胞浓度至5×106ml-1,取100μl细胞悬液加到流式试管中,加入20μl 50mg/ml的鼠抗人CD28抗体混匀,4℃孵育40分钟。……