张 栋 孔德璇 和珍珍 瞿全新

磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路是一个经典的抗凋亡、促存活的信号转导途径，在肿瘤发生、增殖、侵袭、转移及放化疗抵抗中发挥重要作用。PI3K/Akt通路异常与卵巢癌的发生、发展有关，PI3K抑制剂联合传统化学疗法可能是一种有效抑制肿瘤生长和腹水产生的方法[1]。肿瘤细胞对顺铂（DDP）的获得性和先天性的耐药是DDP类化疗药抗肿瘤的一个最大障碍[2]。本研究利用LY294002抑制PI3K/Akt通路，探讨PI3K/Akt通路在卵巢癌DDP耐药中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 （1）细胞系：人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞顺铂敏感株SKOV3，由天津医科大学免疫学实验室提供；人卵巢癌浆液性乳头状囊腺癌细胞DDP耐药株SKOV3/DDP，购自北京市肿瘤医院药物研究所。（2）仪器与试剂：一抗（PI3K兔抗人单克隆抗体、Akt兔抗人单克隆抗体）购自长沙嘉美生物公司；一抗（β-actin兔多克隆抗体）购自美国Santa Cruz公司；二抗（HRP-标记山羊抗兔IgG）购自北京中杉金桥生物技术有限公司，LY294002购自Promega公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组 S KOV3、SKOV3/DDP细胞于37℃、5%CO2、含10%小牛血清的RPMI 1640培养基中培养。LY294002作用前后SKOV3、SKOV3/DDP细胞DDP半数抑制浓度值（IC50）实验分组。（1）LY294002作用组：将2种细胞分别置于LY294002浓度为40 μmol/L的培养基中，调节细胞浓度为1.0×105/mL，加入96孔板中，每孔180 μL培养4 h后取出，弃掉培养基，每孔加入含10%小牛血清的RPMI 1640培养基180 μL。配制各浓度DDP，每孔加入20 μL DDP，使DDP终质量浓度分别为 1 00.00、50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56及0.78 mg/L，每一浓度设4个平行孔。同时设立对照孔（只含等体积细胞悬液，不加药物）、空白调零孔（只含等体积完全培养基，不加药物）培养72 h。（2）LY294002作用前组：调节2种细胞浓度为1.0×105/mL，加入96孔板中，每孔180 μL，培养4 h后取出，加入各浓度DDP，方法同上，培养72 h。……